《Immuno》：Dysregulated Efferocytosis in CAD: TNF-α and TGF-β Silencing Reveals Functional Divergence in M1 and M2 Macrophages
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本研究通过siRNA沉默TNF-α和TGF-β，首次在梗阻性与非梗阻性冠状动脉疾病（CAD）患者来源的M1/M2巨噬细胞中揭示：TNF-α抑制可显著增强M2巨噬细胞对早期（非梗阻性CAD）和晚期（梗阻性CAD）凋亡小体的清除能力，而TGF-β则发挥相反作用。该发现为靶向炎症因子恢复胞葬作用（efferocytosis）提供了新视角。
引言
胞葬作用（efferocytosis）是巨噬细胞清除凋亡细胞以维持免疫稳态的关键过程，在冠状动脉疾病（CAD）中具有重要作用。巨噬细胞主要分为M1（促炎型）和M2（抗炎型）两种表型，其胞葬效率受肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和转化生长因子-β（TGF-β）等炎症因子调控。本研究旨在探讨TNF-α和TGF-β沉默对CAD患者来源的M1和M2巨噬细胞胞葬作用的影响，重点关注Mer酪氨酸激酶（MERTK）及其调控蛋白酶ADAM金属肽酶结构域17（ADAM17）的表达变化。
材料与方法
研究纳入27例非梗阻性和29例梗阻性CAD患者，分离外周血单核细胞（PBMC）并分化为M1（GM-CSF+IFN-γ+LPS诱导）和M2（M-CSF+IL-4+IL-13诱导）巨噬细胞。通过氧化低密度脂蛋白（oxLDL）处理72小时和168小时分别制备早期和晚期凋亡小体。采用siRNA沉默TNF-α和TGF-β基因后，通过流式细胞术评估巨噬细胞对凋亡小体的清除效率，并利用qPCR检测MERTK、ADAM17、TNF-α和TGF-β的mRNA表达水平。同时使用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定细胞培养上清液中可溶性MERTK的浓度。
结果
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巨噬细胞表型验证
CD14表达分析显示，单核细胞分化为巨噬细胞后CD14表达显著下降（M1:<4.05%，M2:35.78-46.61%），证实极化成功。CD11b在单核细胞和巨噬细胞中稳定表达（77.19-92.97%）。
- 2.
胞葬效率的差异性
M2巨噬细胞的胞葬能力显著优于M1巨噬细胞（p=0.002）。在非梗阻性CAD中，M2巨噬细胞对早期凋亡小体的清除效率最高（11.92%±5.54%），显著高于梗阻性CAD组（p=0.049）；而梗阻性CAD的M2巨噬细胞更擅长清除晚期凋亡小体（6.70%±3.68%，p=0.036）。
- 3.
基因表达调控
MERTK表达在胞葬作用后显著上调，尤其在M2巨噬细胞暴露于晚期凋亡小体时（梗阻性CAD:21.17±6.38倍，p=0.010）。ADAM17表达则普遍下调，与胞葬效率呈负相关。TNF-α和TGF-β在胞葬过程中均被激活，其中TNF-α在M1巨噬细胞（非梗阻性CAD，晚期凋亡小体）中上调5.02±1.14倍（p=0.005），TGF-β在M2巨噬细胞（梗阻性CAD，晚期凋亡小体）中上调2.40±0.64倍（p=0.043）。
- 4.
基因沉默的效应
TNF-α沉默使M2巨噬细胞对早期凋亡小体的清除率从11.92%提升至46.78%（p<0.001），而对晚期凋亡小体的清除率在梗阻性CAD组从6.70%升至29.24%（p<0.001）。相反，TGF-β沉默显著抑制胞葬作用（例如非梗阻性CAD的M2巨噬细胞降至0.69%，p=0.013）。值得注意的是，这些变化未伴随MERTK或ADAM17表达的显著改变，提示存在非MERTK-ADAM17通路调控机制。
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可溶性MERTK的动态
M1巨噬细胞的可溶性MERTK水平普遍高于M2巨噬细胞，但胞葬作用前后无显著差异。TNF-α沉默后，M2巨噬细胞（非梗阻性CAD）的可溶性MERTK呈下降趋势（1.51±1.74 vs. TGF-β沉默组2.89±1.89），表明细胞因子可能间接影响MERTK剪切。
讨论
本研究首次在患者来源的巨噬细胞中揭示TNF-α和TGF-β对胞葬作用的双向调控：TNF-α作为抑制因子，其沉默可增强凋亡细胞清除；TGF-β则发挥促进作用。这种调控具有表型依赖性，且与CAD临床亚型相关——非梗阻性CAD的M2巨噬细胞偏好早期凋亡小体，而梗阻性CAD的M2巨噬细胞转向晚期凋亡小体清除，反映了疾病进展中的免疫适应。尽管MERTK-ADAM17轴未被直接调控，但胞葬作用可触发TNF-α和TGF-β的反馈激活，形成炎症-清除循环。该发现为CAD的免疫治疗提供了新靶点，例如通过抑制TNF-信号或补充TGF-β恢复胞葬功能。
结论
TNF-α和TGF-β通过非MERTK-ADAM17通路调控CAD巨噬细胞的胞葬作用，其效应因巨噬细胞表型和疾病阶段而异。靶向这些细胞因子可能成为恢复免疫稳态、延缓动脉粥样硬化进展的潜在策略。
