《Veterinary Medicine International》：Noninvasive Assessment of Testosterone Levels and Male Sexual Behavior in Sambar Deer (Rusa unicolor) as a Critical Step Toward Conservation in Captivity
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本文通过非侵入性方法，首次系统评估了热带鹿科动物水鹿（Rusa unicolor）在不同鹿角阶段（硬角期、蜕皮期、茸角期）的粪便睾酮（Testosterone）水平变化及其与雄性性行为（如肛阴嗅闻、卷唇反应等）的关联。研究发现硬角期睾酮水平最高且与性行为频率呈显著正相关（rs=0.763, p<0.01），而茸角期虽睾酮水平高但性行为活跃度低，提示睾酮在茸角期可能具有促进鹿角生长等非繁殖功能。该研究为热带鹿类繁殖生理提供了关键数据，对优化圈养繁殖策略具有重要指导意义。
摘要
水鹿作为热带鹿科动物的代表，其繁殖生理机制相较于温带鹿种研究较少。本研究以印度尼西亚亚齐省Taman Rusa动物园的8头3-5岁成年雄鹿为对象，采用非侵入性方法系统分析了鹿角周期不同阶段（硬角、蜕皮、茸角）的粪便睾酮浓度动态，并探讨其与11种雄性性行为（如接近、跟随、肛阴嗅闻、爬跨等）的关联。通过酶联免疫吸附测定（ELISA）技术检测粪便睾酮，并利用线性混合模型和Spearman相关性进行统计分析。
1. 引言
水鹿因栖息地丧失和盗猎被世界自然保护联盟（IUCN）列为易危物种。圈养繁殖计划需基于对其繁殖机制的深入理解，而雄鹿的生殖内分泌研究尤为缺乏。睾酮在鹿类中调控鹿角周期、精子发生和性行为，但温带鹿种（如马鹿、白尾鹿）的生殖活动受光周期驱动呈季节性，而热带水鹿的繁殖与鹿角更替则全年异步发生。非侵入性激素监测方法通过粪便样本可有效避免动物应激，为本研究提供了技术基础。
2. 材料与方法
2.1. 研究对象与场地
研究在3个月内对8头雄鹿进行观察，根据鹿角形态将其划分为硬角期（3头）、茸角期（2头）和过渡期（3头）。每头鹿每周采集1-3次粪便样本，同时记录行为数据。
2.2. 性行为与鹿角阶段观察
采用焦点动物取样法和全事件记录法记录性行为，行为谱分为交配前、交配和交配后三类，包括肛阴嗅闻（as）、卷唇反应（fl）、爬跨（mo）等。
2.3-2.5 样本处理与激素检测
粪便样本经80%乙醇提取后，使用DRG睾酮ELISA试剂盒（EIA-1559）检测。通过平行性测试、准确性验证（回收率96.32%）和生物验证（成年雄鹿睾酮显著高于幼鹿和雌鹿，p<0.01）确保检测可靠性。
2.6. 数据分析
采用线性混合模型（鹿角阶段为固定效应，个体为随机效应）分析激素差异，Spearman检验分析激素与行为相关性，并考虑1-2天的激素排泄延迟。
3. 结果
3.1. ELISA验证
粪便提取物稀释曲线与标准曲线平行（p>0.05），板内和板间变异系数分别低于8.11%和9.52%。
3.2. 不同鹿角阶段的睾酮水平
硬角期（15.42±2.31 ng/g）和茸角期（14.18±1.76 ng/g）睾酮水平显著高于蜕皮期（4.58±0.71 ng/g）（p<0.01），硬角期与茸角期间无显著差异。
3.3. 性行为与激素关联
91.40%的性行为发生于硬角期，茸角期和蜕皮期分别占8.07%和0.54%。硬角期睾酮水平与性行为频率呈强正相关（rs=0.763, p<0.01），而茸角期虽睾酮水平高，但性行为频率低且无显著相关性。交配前行为（如肛阴嗅闻）占比最高（66.13%），交配行为（爬跨、交配）仅占5.91%。
4. 讨论
本研究首次揭示热带水鹿睾酮水平与鹿角周期、性行为的阶段特异性关联。硬角期的高睾酮水平驱动性行为高峰，符合其繁殖竞争需求；而茸角期的高睾酮可能主要用于促进鹿角生长与组织修复，而非直接激发性行为。这一发现提示睾酮在水鹿中具有多效性功能，超越传统的繁殖行为调控范畴。研究局限性包括样本量小和未覆盖完整年度周期，未来需结合雌鹿发情监测及环境因子进一步验证。
5. 结论
水鹿睾酮水平在硬角期和茸角期显著升高，但仅硬角期睾酮与性行为密切关联。成果为圈养水鹿的繁殖管理提供了生理学依据，如依据鹿角阶段优化配种时机，提升保护实践效率。
