靶向 LDHA：噪音性听力损失（NIHL）治疗的新曙光

噪音性听力损失（NIHL）机制不明且缺有效治疗手段。研究人员聚焦于糖酵解相关的 LDHA，探究其在 NIHL 中对血管纹内皮细胞（SV-ECs）及巨噬细胞（Mφ）的作用。结果发现 LDHA 可经 CX3CL1-CX3CR1 通路调节 Mφ 功能，或为 NIHL 治疗提供新策略。

　　在我们的日常生活中，噪音无处不在。从繁华都市的车水马龙，到施工现场的嘈杂声响，再到耳机中震耳欲聋的音乐，这些噪音正悄然威胁着我们的听力健康。据世界卫生组织统计，超过 12% 的世界人口饱受噪音性听力损失（Noise-induced Hearing Loss，NIHL）的困扰 。NIHL 不仅会导致听力阈值升高、永久性耳蜗毛细胞损失，还会引发睡眠和认知障碍等非听觉症状，严重降低患者的生活质量，同时也给社会带来了沉重的经济负担。然而，目前美国食品药品监督管理局（FDA）尚未批准任何用于治疗 NIHL 的药物，其发病机制也有待进一步阐明。

氧化应激介导的对耳蜗血管纹（Stria Vascularis，SV）的损伤被认为是 NIHL 的关键致病机制之一。SV 位于耳蜗外侧壁，对维持耳蜗内电位和离子平衡起着至关重要的作用 。其中，SV 中的内皮细胞（SV-ECs）是血迷路屏障（Blood-labyrinth Barrier，BBB）的重要组成部分，极易受到噪音诱导的氧化应激影响，进而破坏细胞间连接，扰乱内耳稳态。但目前关于氧化应激诱导 SV-ECs 损伤的机制，以及其与其他内耳细胞的相互作用仍知之甚少。

此外，细胞对氧化应激的反应是一个耗能过程，而 SV-ECs 约 85% 的能量来源于糖酵解。已有研究表明，糖酵解在与内皮细胞相关的疾病中发挥着关键作用，且在感音神经性听力损失的发病机制中也具有重要意义。但糖酵解在 SV-ECs 功能障碍中的具体作用，尤其是 SV-ECs 是否利用糖酵解相关的 LDHA（L-lactate dehydrogenase A chain，乳酸脱氢酶 A）与 NIHL 微环境中的其他细胞进行细胞间通讯，尚不明确。巨噬细胞（Macrophages，Mφ）作为免疫细胞，在 NIHL 的发生发展中也扮演着重要角色。在正常情况下，其有助于维持内耳环境的稳态；然而在 NIHL 中，Mφ 的数量和功能发生改变，会导致持续的炎症反应，加重听力损失 。但 NIHL 中内耳 Mφ 功能障碍的免疫调节机制仍有待深入研究。

为了解开这些谜团，中山大学附属第一医院的研究人员开展了一项深入研究，相关成果发表在《Cell Death and Disease》杂志上。该研究旨在阐明糖酵解相关的 LDHA 在氧化应激诱导的 SV-ECs 损伤中的作用，并探索其与内耳 Mφ 在 NIHL 背景下的相互作用。

研究人员主要运用了以下关键技术方法：首先，构建 NIHL 小鼠模型，将 C57BL/6 雄性小鼠暴露于宽带噪音中诱导 NIHL；其次，进行细胞实验，培养 SV-ECs 并建立氧化应激模型，通过 RNA 干扰、慢病毒构建等技术调控 LDHA 的表达；然后，利用多种检测技术，如细胞内活性氧（ROS）检测、细胞活力检测、蛋白质免疫印迹（Western blot）、实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT-PCR）等，对细胞和组织的相关指标进行检测分析；最后，采用蛋白质组学分析技术，研究 SV-ECs 分泌蛋白的差异，探索相关信号通路 。

下面来看具体的研究结果：

1. SV-ECs 的功能受噪音诱导的氧化应激破坏：研究人员成功建立 NIHL 小鼠模型，发现噪音暴露后，小鼠听力功能明显下降，耳蜗中氧化应激指标 3NT 表达升高，抗氧化基因表达降低。同时，SV 结构受损，SV-ECs 被破坏，血管横截面积增大。体外实验也证实，过氧化氢（H₂O₂）诱导的氧化应激会损害 SV-ECs 的迁移、成管能力和屏障完整性，增加 ROS 水平 。
2. 氧化应激改变 SV-ECs 的糖酵解：通过对 H₂O₂处理的 SV-ECs 进行蛋白质组学分析，发现差异蛋白主要富集在糖酵解途径。进一步研究表明，氧化应激会使 SV-ECs 中糖酵解相关基因表达下降，其中 LDHA 的基因和蛋白表达在氧化应激早期显著降低。在 NIHL 小鼠模型中也观察到类似现象，噪音暴露后 SV 中糖酵解相关基因和蛋白表达下降，之后逐渐恢复 。
3. 抑制 LDHA 降低 SV-ECs 活力并促进其抗氧化反应：利用 RNA 干扰技术降低 LDHA 表达，或使用 LDHA 小分子抑制剂 az-33 处理 SV-ECs，发现细胞活力显著降低，乳酸释放减少，屏障完整性和迁移能力受损，同时抗氧化基因表达增加，表明抑制 LDHA 可增强 SV-ECs 的抗氧化功能 。
4. 抑制 SV-ECs 中的 LDHA 对 Mφ 具有抗炎作用：免疫荧光分析和流式细胞术检测发现，噪音暴露后耳蜗中 Mφ 数量增加，促炎型 Mφ 比例升高 。体外实验中，用抑制 LDHA 表达的 SV-ECs 分泌蛋白刺激 Mφ，可增加抗炎因子 Fizz1 的表达，降低促炎因子 IL-6 和 TNF-α 的水平。体内实验也证实，鼓膜内注射 siLDHA 可增加耳蜗中抗炎因子的表达，减少促炎型 Mφ 的数量 。
5. LDHA 通过 CX3CL1-CX3CR1 通路调节 SV-ECs 介导的 Mφ 功能障碍：蛋白质组学分析发现，抑制 LDHA 会改变 SV-ECs 分泌蛋白的组成，其中 CX3CL1 的表达变化尤为显著 。进一步研究表明，H₂O₂刺激会使 SV-ECs 中 CX3CL1 表达升高，抑制 LDHA 则使其表达降低。中和 CX3CL1 可减轻 H₂O₂处理的 SV-ECs 分泌蛋白对 Mφ 的促炎作用，过表达 LDHA 同时抑制 CX3CL1 也能降低对 Mφ 的促炎作用，说明 LDHA 通过 CX3CL1-CX3CR1 通路调节 SV-ECs 与 Mφ 之间的相互作用 。

综合上述研究结果，该研究得出结论：氧化应激在体内外均可导致 SV-ECs 急性功能损伤，并使糖酵解相关的 LDHA 在早期显著减少。抑制 SV-ECs 中的 LDHA 会介导 SV-ECs 损伤，但同时对 Mφ 具有抗炎作用，且这种作用至少部分是通过 CX3CL1-CX3CR1 信号通路实现的。这一发现揭示了 LDHA 在 NIHL 发病机制中的重要作用，为 NIHL 的治疗提供了新的潜在靶点，有望为开发治疗 NIHL 的新策略提供理论依据 。

然而，该研究也存在一定的局限性。虽然研究表明抑制 SV-ECs 中的 LDHA 具有抗氧化和抗炎作用，但还需要通过在 SV-ECs 中特异性敲低 LDHA 的小鼠模型进行体内实验，进一步验证这些结果。此外，研究主要关注了分泌蛋白对 Mφ 功能的直接影响，而分泌蛋白对其他细胞（如螺旋神经节神经元和毛细胞）的间接影响尚未明确。同时，目前对耳蜗 Mφ 表型的鉴定方法还有待进一步优化，可采用更先进的技术（如流式细胞术和多重免疫组化），以更全面地了解内耳 Mφ 。尽管如此，这项研究依然为 NIHL 的研究开辟了新的方向，为未来攻克这一难题奠定了坚实的基础，相信在后续研究的不断完善下，将为 NIHL 患者带来新的希望 。