氯化两面针碱通过抑制 IGF2BP3 并以 m6A 依赖方式调节代谢途径抑制肝细胞癌进展：机制新探与潜在治疗曙光

为探究氯化两面针碱（NC）抗肝细胞癌（HCC）的潜在机制，广西医科大学研究人员开展相关研究。结果表明，NC 可抑制 HCC 细胞增殖、转移和血管生成，其通过靶向 IGF2BP3，调节代谢相关基因的 m6A 修饰水平发挥作用，为 HCC 治疗提供新方向。

　　在全球范围内，肝细胞癌（Hepatocellular carcinoma，HCC）犹如一颗高悬的 “健康炸弹”，严重威胁着人类生命健康。它是肝脏癌症的主要类型，发病率和死亡率都相当高，每年新增诊断病例超 90 万 。即便当前治疗手段多样，但晚期 HCC 主要依赖全身治疗，像酪氨酸酶抑制剂、免疫检查点抑制剂等，可耐药性和肿瘤异质性问题却让这些治疗效果大打折扣，患者的五年相对生存率还不到 20% 。正因如此，探寻源自植物的预测生物标志物和治疗策略，成为了改善 HCC 患者生存状况和预后的关键希望所在。

广西医科大学的研究人员勇挑重担，开展了一项意义重大的研究。他们聚焦于氯化两面针碱（Nitidine chloride，NC），这种从传统中药两面针的根或茎中提取的活性成分，此前已被发现具有一定的抗肿瘤活性，但它抗 HCC 的具体分子机制却一直模糊不清。研究人员猜测 NC 可能通过调节 N⁶- 甲基腺苷（m⁶A）修饰来抑制 HCC 进展，于是就此展开深入探索。最终，研究成果发表在了《Molecular Medicine》杂志上。

为了揭开 NC 抗 HCC 的神秘面纱，研究人员采用了多种先进技术。RNA 测序（RNA-seq）和甲基化 RNA 免疫沉淀测序（MeRIP-seq）用于探索 NC 抗 HCC 的潜在靶点和机制；通过实时定量聚合酶链反应（RT-qPCR）、蛋白质免疫印迹（WB）对相关基因和蛋白表达进行验证；运用分子对接、分子动力学（MD）模拟、表面等离子共振（SPR）等技术，确定 NC 与目标蛋白的相互作用；构建 HCC 细胞和斑马鱼异种移植模型，在体内外验证 NC 的抗 HCC 效果；还利用 RNA 稳定性实验确定下游靶基因。同时，研究人员收集了多个数据库中的数据，用于分析基因表达和预后价值。

研究结果如下：

• NC 抑制 HCC 细胞增殖：体外实验显示，NC 对 Huh7 和 MHCC97-H 细胞的生长具有抑制作用，且呈时间和浓度依赖性。48 小时时，NC 对 Huh7 细胞的半数抑制浓度（IC₅₀）为 4.240（3.865 - 4.651）μmol/L，对 MHCC97-H 细胞的 IC₅₀为 0.4772（0.4217 - 0.5349）μmol/L。
• NC 抑制 HCC 肿瘤生长、转移和血管生成：在斑马鱼异种移植瘤模型中，与溶剂对照组相比，NC 处理组的肿瘤荧光强度和荧光面积显著降低，表明 NC 能有效抑制 HCC 肿瘤生长；同时，NC 还能显著降低远端转移瘤的荧光强度和最远转移距离，抑制 HCC 细胞的转移；在研究肿瘤血管生成的实验中，NC 处理组的斑马鱼肠下血管生成明显减少。
• NC 直接靶向并抑制 IGF2BP3 表达：RNA-seq 结果显示，NC 处理后，Huh7 细胞中 IGF2BP3 表达显著下调。RT-qPCR 和 WB 实验进一步验证了这一结果。分子对接和 MD 模拟表明，NC 与 IGF2BP3 能形成稳定的结合构象，且存在多个氢键。CCK8 实验发现，IGF2BP3 基因敲低（IGF2BP3-KD）的 HCC 细胞对 NC 的药物敏感性降低，SPR 分析也证实了 NC 与 IGF2BP3 具有很强的结合亲和力。
• IGF2BP3 高表达与 HCC 患者不良预后相关：综合分析多个数据库的数据发现，HCC 组织中 IGF2BP3 mRNA 和蛋白表达均显著高于正常肝组织。而且，IGF2BP3 高表达与患者的总体生存、无复发生存、无进展生存和疾病特异性生存不良相关。
• IGF2BP3 敲低抑制 HCC 细胞增殖、迁移和侵袭：通过慢病毒转染成功敲低 Huh7 和 MHCC97-H 细胞中 IGF2BP3 的表达后，与对照组相比，IGF2BP3-KD 组细胞的增殖和伤口愈合速率明显降低，迁移和侵袭能力也显著下降。
• IGF2BP3 下游靶基因与代谢过程密切相关：MeRIP-seq 分析发现，NC 处理后，Huh7 细胞中差异 m⁶A 峰主要集中在 UTR3 区域。通过一系列交集分析，确定了 197 个潜在的下游靶基因，这些基因主要富集在多个代谢相关途径。进一步筛选得到 30 个潜在的代谢靶基因，Cox 回归分析表明，这些基因大多可能是 HCC 的危险因素。
• 代谢评分与 HCC 患者临床病理表型和预后相关：基于 30 个代谢基因计算 HCC 患者的代谢评分，发现高代谢评分与患者较差的生存状态、T 分期、TNM 分期和组织学分级相关。高代谢评分组患者的总生存期明显短于低代谢评分组，且代谢评分是 HCC 患者的独立危险因素。
• IGF2BP3 调节代谢基因的表达和稳定性：通过交集分析确定了 6 个可能受 IGF2BP3 调控的代谢相关基因，RNA 稳定性实验表明，IGF2BP3 敲低和 NC 处理均显著降低了 CKB、RRM2、NME1、PKM 和 UXS1 的 mRNA 稳定性。

综合来看，本研究证实了 NC 可通过靶向 IGF2BP3，以 m⁶A 依赖的方式调节代谢途径，从而发挥抗 HCC 作用，并确定了一系列代谢相关的靶基因。这不仅为深入理解 NC 抗 HCC 的机制提供了新视角，还为 HCC 的治疗提供了潜在的新靶点和新思路。不过，研究也存在一些有待完善的地方，比如缺乏 NC 直接结合 IGF2BP3 的更确凿证据，以及 IGF2BP3 是否通过 m⁶A 修饰调节下游基因也需要进一步验证，后续还需更多研究加以完善。 】