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为解决汉坦病毒（HTNV）中和抗体（NAbs）检测方法存在的操作复杂、需高安全设施等问题，研究人员开展了基于表达 HTNV 糖蛋白的重组水泡性口炎病毒（rVSV-HTNV-GP）空斑减少中和试验（PRNT）的研究。结果表明该方法可靠、灵敏度高，可作为评估 HTNV NAbs 的替代方法。
肾综合征出血热（HFRS），这个听起来陌生却暗藏危险的疾病，是由汉坦病毒（HTNV）引发的。它可不是个好对付的 “家伙”，病死率高达 1% - 10%。目前，在一些流行地区，已获批的灭活疫苗诱导产生的中和抗体（NAbs）水平较低，而早期给予 NAbs 对 HFRS 患者的康复很有帮助。所以，准确测量 NAbs 水平对于评估感染或接种疫苗后的免疫反应至关重要。
传统的 HTNV NAbs 测量的 “黄金标准” 是焦点减少中和试验（FRNT），但它就像个 “娇贵” 的试验，需要技术娴熟的专业人员操作，而且得在高生物安全防护设施中进行，这就大大限制了它的广泛应用。在这样的背景下，来自空军军医大学（第四军医大学）基础医学院微生物学系和陕西省疾病预防控制中心等机构的研究人员，决心探索出更好的检测方法。他们开展了一项关于建立替代 NAbs 滴定方法的研究，并将其与传统的 FRNT 进行对比。最终，研究成果发表在《Virology Journal》上。
研究人员开展这项研究主要运用了以下几个关键技术方法：首先，收集了 12 例 HFRS 患者的恢复期血清、25 例接种二价 HFRS 疫苗者不同时间点的血清以及 10 例健康供者的血清作为样本。然后，分别使用基于 rVSV-HTNV-GP 的 PRNT 和基于 HTNV 的 FRNT 这两种方法对血清样本中的 NAbs 进行检测 。
下面来看看具体的研究结果：
- 患者血清中和抗体检测：研究人员最初用 rVSV-HTNV-GP 测量了 12 例 HFRS 患者血清样本中的 NAbs 滴度，大部分患者产生了显著的 NAbs，但患者 NO.8 的 PRNT50滴度较低。同时，通过线性回归分析比较不同试验的半最大中和滴度，发现 rVSV-HTNV-GP 的 log10PRNT50与 HTNV 的 FRNT50滴度之间存在中度皮尔逊相关性（R2=0.5994，p = 0.0052）12。
- 疫苗接种者血清中和抗体检测：为了进一步评估 rVSV-HTNV-GP 替代方法是否适用于评估 HFRS 疫苗接种者的 HTNV NAbs 滴度，研究人员选取了 5 名疫苗接种者不同时间点的 25 份血清样本进行检测。结果显示，rVSV-HTNV-GP 的 PRNT50滴度相对高于基于 HTNV 的 FRNT50 NAbs 滴度，且两种方法的趋势曲线基本一致。通过线性回归分析，发现 log10PRNT50与 FRNT50滴度之间存在强皮尔逊相关性（R2=0.3440，p = 0.0021）34。
- 方法的重复性和特异性：研究人员随机选择了 3 份血清样本，重复进行 PRNT 实验 3 次，结果显示血清的 50% 抑制滴度在各次重复实验和初始实验之间差异很小，一致性分析几乎为 1.0，这表明该方法重复性良好。同时，用 HTNV - 基于的 FRNT 和 rVSV-HTNV-GP - 基于的 PRNT 检测 10 份健康供者的汉坦病毒阴性对照样本的 NAbs 滴度，所有阴性样本的所有稀释度和感染率均在 100% 左右，几乎完全不能抑制 HTNV 感染，两种方法结果相似，证实了两种方法的特异性56。
综合上述研究结果，研究人员得出结论：基于 rVSV-HTNV-GP 的 PRNT 方法为量化 NAbs 滴度提供了一种可行的替代 HTNV - 基于的 FRNT 检测的方法。这种方法使用表达 HTNV 糖蛋白的 rVSV-HTNV-GP，可在生物安全二级设施中操作，比使用 HTNV 更安全。此外，该方法还可用于监测先前感染或接种疫苗个体中保护性 NAbs 滴度的潜在下降，有助于大规模血清流行病学研究。
不过，这项研究也存在一些局限性。尽管一致性分析得到了验证，但 PRNT50和 FRNT50滴度之间平均存在 1.2 log10EC50值的差异，表明 rVSV-HTNV-GP 比真实的 HTNV 更敏感。而且研究中还发现了一例恢复期血清在较低稀释度下出现抗体依赖增强（ADE）效应的现象，其确切机制仍需进一步研究。另外，还需要对更多感染和接种疫苗的个体进行研究，以确认这种低生物安全水平替代方法在评估 HTNV NAbs 方面的普遍适用性。
总体而言，这项研究建立的基于 rVSV-HTNV-GP 的 PRNT 方法具有重要意义，为 HTNV NAbs 的检测提供了更便捷、安全的选择，推动了相关领域的研究进展，有望在未来的临床诊断和疫苗评估等方面发挥重要作用。
