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三阴性乳腺癌（TNBC）治疗面临诸多难题，如化疗效果有限、纳米疗法存在缺陷等。研究人员开展了桔梗来源的细胞外囊泡（PGEVs）抑制 TNBC 的研究。结果显示 PGEVs 能抑制肿瘤生长、调节免疫和肠道菌群。这为 TNBC 治疗提供了新方向。
在癌症治疗的领域中，三阴性乳腺癌（TNBC）就像一座难以攻克的堡垒，威胁着众多女性的健康。TNBC 具有高侵袭性、高转移率、高复发率和高死亡率的特点，传统化疗因药物分布不精准、副作用严重，对很多患者疗效不佳。虽然肿瘤免疫疗法给 TNBC 治疗带来了新希望，但肿瘤免疫原性低和免疫抑制性肿瘤微环境（TME）等问题，使得免疫疗法效果大打折扣。与此同时，纳米疗法虽备受关注，可获批临床应用的却寥寥无几，其长期治疗效率低、生物相容性存疑、有毒催化剂和有机溶剂残留等问题，限制了它的发展。在这样的困境下，寻找一种安全、有效的治疗方法迫在眉睫。
中国农业科学院特产研究所的研究人员勇挑重担，开展了一项关于桔梗来源的细胞外囊泡（PGEVs）抑制 TNBC 的研究。他们发现，PGEVs 在治疗 TNBC 方面展现出巨大潜力，相关研究成果发表在《Journal of Nanobiotechnology》上。
研究人员在这项研究中用到了多个关键技术方法。首先，通过超速离心和蔗糖梯度离心法从桔梗中提取 PGEVs；利用透射电子显微镜（TEM）、纳米流式细胞术（NanoFCM）等技术对 PGEVs 的形态、粒径、浓度和 zeta 电位等进行表征；采用蛋白质组学和脂质组学分析技术鉴定 PGEVs 的成分；运用荧光成像、流式细胞术等方法研究 PGEVs 的细胞摄取、体内分布、生物安全性和抗肿瘤活性等；还借助 16S rRNA 基因测序分析肠道菌群的变化。
下面来看看具体的研究结果：
- PGEVs 的鉴定与表征：研究人员成功从桔梗中提取出 PGEVs，TEM 图像显示其为典型的球形纳米囊泡，平均直径约 73nm，zeta 电位为 - 19.23mV。蛋白质组学和脂质组学分析表明，PGEVs 含有丰富的蛋白质、脂质、RNA 和活性分子，如磷脂、热休克蛋白等，这些成分暗示了 PGEVs 在免疫调节等方面的潜在作用。
- PGEVs 的体外稳定性和细胞摄取：在模拟胃肠道环境中，PGEVs 能保持稳定，在胃和小肠中至少 24 小时内可抵抗消化。体外实验发现，4T1 细胞、A549 细胞和 Raw 264.7 巨噬细胞都能高效摄取 PGEVs，且摄取效率随时间增加。
- PGEVs 的体外抗肿瘤活性：CCK - 8 实验表明，PGEVs 能浓度和时间依赖性地抑制 4T1 和 A549 细胞增殖，对 4T1 细胞（TNBC 细胞系）的抑制作用更强。Annexin V - FITC/PI 实验显示，PGEVs 可诱导肿瘤细胞凋亡，4T1 细胞的凋亡率明显高于 A549 细胞。此外，PGEVs 处理后，细胞内活性氧（ROS）水平显著升高，这可能是其诱导细胞凋亡的重要机制。
- PGEVs 诱导 TAMs 极化：研究人员利用 transwell 共培养系统模拟肿瘤微环境，发现 PGEVs 能促进 Raw 264.7 细胞向 M1 型巨噬细胞极化，表现为 M1 型标记物（iNOS、TNF - α、IL - 6 和 IL - 12）表达上调，M2 型标记物（CD206）表达下调，同时促炎细胞因子 TNF - α 和 IL - 6 分泌增加。极化后的 TAMs 能有效抑制肿瘤细胞生长。
- PGEVs 的体内分布和生物安全性：给小鼠口服或静脉注射 DiD 标记的 PGEVs 后发现，PGEVs 主要在肝脏、肾脏和肿瘤部位积累，且能穿过血脑屏障。不同给药方式下，PGEVs 在体内的分布有所差异。生物安全性评估显示，PGEVs 对小鼠体重、肝肾功能指标（ALT、AST、BUN 和 CREA）无明显影响，组织学评估也未发现器官和脑组织有形态异常或损伤。
- PGEVs 的体内抗肿瘤效果和免疫调节作用：在 TNBC 小鼠模型中，口服或静脉注射 PGEVs 均能显著抑制肿瘤生长，表现为肿瘤体积减小、重量减轻，肿瘤细胞凋亡增加（TUNEL 染色）、增殖减少（Ki67 表达降低），肿瘤血管生成受到抑制（CD31 表达减少）。进一步研究发现，PGEVs 能促进 TAMs 向 M1 型极化，增强细胞毒性 T 淋巴细胞（CTLs）的浸润和活性，降低肿瘤组织中 PD - 1 的表达，同时血清中与抗肿瘤免疫反应相关的细胞因子（TNF - α、IL - 6 和 IFN - γ）浓度升高，有效激活和调节了机体的免疫反应。
- PGEVs 对肠道菌群的调节作用：16S rRNA 基因测序分析表明，PGEVs 处理后，TNBC 小鼠肠道菌群的丰富度和多样性增加（Chao1、Shannon 和 Simpson 指数升高），有害菌（如拟杆菌属 Bacteroides）相对丰度降低，有益菌（如乳杆菌属 Lactobacillus）相对丰度增加，维持了肠道菌群的平衡，有利于抑制肿瘤发展。
综合研究结论和讨论部分，PGEVs 作为一种源自天然植物的纳米囊泡，在 TNBC 治疗中展现出多方面的优势。它能有效抑制肿瘤细胞增殖、诱导细胞凋亡，通过调节肿瘤微环境中的免疫细胞和肠道菌群，增强机体的抗肿瘤免疫反应。与传统治疗方法相比，PGEVs 具有生物安全性高、副作用小等特点，为 TNBC 的治疗提供了一种新的 “绿色” 纳米疗法，有望在未来临床应用中发挥重要作用，为 TNBC 患者带来新的希望。
