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肺癌严重威胁人类健康，非小细胞肺癌（NSCLC）占比大。为探究 RIT1 致癌特性，大连医科大学研究人员聚焦肺腺癌中 RIT1 突变。研究发现 RIT1 突变促进细胞生长且使细胞对铁死亡更敏感，这为治疗携带 RIT1 突变的肺癌患者提供新策略。
在癌症的 “战场” 上，肺癌始终是 “劲敌”，严重威胁着人类的健康。据统计，全球每年肺癌新发病例超 220 万，是死亡率最高的恶性肿瘤之一。非小细胞肺癌（NSCLC）作为肺癌的主要组织学亚型，占据了约 85% 的病例。目前，针对 NSCLC 的治疗虽取得一定进展，像基于对癌细胞基因改变的分子特征分析，成功开发出针对致癌表皮生长因子受体（EGFR）和 RAS 家族蛋白的靶向疗法，延长了患者生存期。但仍有许多问题亟待解决，比如对 RAS 家族中 RIT1 基因的研究还不够深入。RIT1 基因编码的 Ras - like without CAAX 1（RIT1）与 RAS 密切相关，在 NSCLC 样本中有一定的突变频率，但相比 KRAS、NRAS 和 HRAS，其野生型和致癌突变体的功能特性尚不明晰。同时，如何进一步拓展 NSCLC 的治疗策略，开发更有效的靶向疗法，成为了科研人员迫切需要攻克的难题。在这样的背景下，大连医科大学的研究人员开展了相关研究，试图揭开 RIT1 在肺癌中的神秘面纱，该研究成果发表在《Biology Direct》上。
研究人员主要运用了以下关键技术方法：通过 cBioPortal 平台整合的癌症基因组数据进行生物信息学分析；构建稳定细胞系，包括 RIT1 稳定敲低和过表达细胞系；进行多种实验，如集落形成实验检测细胞增殖能力、检测铁死亡细胞死亡实验评估细胞对铁死亡的敏感性、转录组分析探究基因表达变化，还构建了异种移植小鼠模型研究体内情况。
研究结果如下：
- RIT1 改变与蛋白表达增加相关：利用 cBioPortal 平台分析 NSCLC 样本中 KRAS、HRAS、NRAS 和 RIT1 基因的改变，发现 RIT1 基因改变主要为扩增和突变，且肺腺癌患者中 RIT1 基因改变与较差的总生存期相关。生成棒棒糖图展示 RIT1 突变热点，发现 Met 90、Ala 77 和 Phe 82 突变频率较高。构建 RIT1 突变体（A77S、F82L 和 M90I）表达载体，通过 GFP 标记观察细胞内分布，发现突变体与野生型分布相似。Western blot 分析显示突变型 RIT1 表达水平显著高于野生型，环己酰亚胺追踪实验表明致癌 RIT1 突变体更稳定，蛋白丰度增加。
- RIT1 对细胞生长的影响：通过 cBioPortal 综合分析发现 RIT1 与 RAS 成员存在共发生趋势。在携带 KRASG12S和 EGFRT790M突变的 A549 和 H1975 细胞中敲低 RIT1，集落形成实验显示细胞增殖明显减少。在 HBE135 - E6E7 细胞中过表达 RIT1 突变体（A77S、F82L 和 M90I），集落形成实验表明其能显著促进细胞增殖。转录组分析发现突变体表达激活了 MAPK/ERK 级联、PI3K/AKT 通路、RAS 信号等肿瘤发生信号级联，还影响了 NFE2L2（NRF2）基因集相关的细胞氧化还原调节因子表达。
- RIT1 表达调节细胞对铁死亡诱导的敏感性：GSEA 分析和差异表达基因（DEG）分析表明突变型 RIT1 表达对 NRF2 靶基因表达有双向影响，且更多呈下调作用。用 GPX4 抑制剂 RSL3 处理 HBE135 - E6E7 细胞，发现致癌 RIT1 突变使细胞对 RSL3 诱导的铁死亡更敏感，铁死亡抑制剂 ferrostatin - 1 可有效阻断。在 A549 细胞中敲低 RIT1，细胞发生铁死亡的比例显著降低，说明 RIT1 蛋白水平与细胞对铁死亡的敏感性相关。
- 致癌 RIT1 的肺癌异种移植物对铁死亡诱导敏感：肺腺癌 NCI - H2110 细胞系含有 RIT1 基因的 M90I 突变，用 RSL3 处理后，细胞易发生铁死亡，且细胞内活性氧（ROS）和脂质 ROS 水平显著增加。敲低 NCI - H2110 细胞内源性 RIT1 表达，细胞对 RSL3 诱导的铁死亡敏感性降低，ROS 水平下降。在体内实验中，用铁死亡诱导剂 IKE 处理 NCI - H2110 异种移植小鼠，IKE 有效抑制了肿瘤生长，免疫组化分析显示 Ki - 67 增殖标记物表达降低，COX - 2 铁死亡标记物表达增加。
研究结论和讨论部分指出，RIT1 在肺癌中的改变与 RAS 蛋白不同，主要表现为基因扩增和突变导致蛋白表达增加，促进肿瘤发生。虽然目前针对致癌 RIT1 的靶向疗法尚未问世，但研究发现致癌 RIT1 突变使细胞对铁死亡更敏感，这为开发针对携带 RIT1 突变的肺癌患者的治疗策略提供了新方向。未来进一步研究 RIT1 在铁死亡调节中的关键下游信号分子，有望为肺癌治疗带来新的突破，为患者带来新的希望。
