探索胞外囊泡RNA在胸膜间皮瘤早期检测中的潜力：转录组特征与生物标志物发现

编辑推荐：胸膜间皮瘤(PM)早期诊断面临生物标志物敏感性不足的挑战。瑞士苏黎世大学医院团队首次解析PM原代细胞分泌的胞外囊泡(EVs)转录组特征，发现80%为蛋白编码RNA，25个S/E分子表型标志基因显著富集，且与EMT、糖酵解等癌症特征通路相关。该研究为PM无创诊断提供新思路，发表于《BMC Cancer》。

　　胸膜间皮瘤(PM)是一种与石棉暴露高度相关的侵袭性癌症，患者确诊时多已晚期，9-19个月的中位生存期凸显早期诊断的紧迫性。当前血清蛋白标志物如间皮素敏感度不足，而胞外囊泡(EVs)作为细胞间通讯载体，在肺癌等肿瘤中已展现诊断潜力，但其在PM中的分子特征仍是空白。瑞士苏黎世大学医院Agnieszka Kraft团队联合法国巴黎笛卡尔大学等机构，首次对PM原代细胞分泌的EVs进行全转录组解析，为破解PM早期检测难题提供新视角。

研究采用Illumina NovaSeq 6000单端测序等关键技术，对4例PM胸水来源的原代细胞培养上清EVs进行RNA测序，并与32例健康血浆EVs公开数据对比。通过Qsmooth批次校正、edgeR差异分析等生物信息学方法，结合qPCR验证和TCGA生存分析，系统揭示PM-EVs的分子特征。

研究结果首先证实ExoEasy Maxi kit可高效分离PM-EVs，电镜显示典型膜结构，Western blot检测到Alix、CD9等EV标志蛋白而Calnexin阴性，排除细胞器污染。RNA-seq显示PM-EVs主要含蛋白编码RNA(80%)和lncRNA(13%)，显著区别于健康血浆EVs。值得注意的是，36个肉瘤样(S)和32个上皮样(E)表型标志基因中，25个在PM-EVs显著上调，包括与干细胞特性相关的MECOM。即便形态学分类为上皮型的PM-E1样本，S标志基因表达仍高于E基因，提示EVs可能携带侵袭性更强的分子特征。

比较组学分析发现PM-EVs特异性富集3,653个基因，其中lncRNA比例显著增高。这些转录本具有更短长度(_P<0.01)但更高外显子密度(_P<0.05)，暗示其经过主动分选以确保稳定性。qPCR验证显示ANXA8、UCHL1等标志物在PM细胞与匹配EVs中表达高度一致(R²>0.8)，而SNHG9等lncRNA在PM患者血浆EVs可检出(Ct值30.9)。功能分析揭示PM-EVs基因显著关联EMT(如COL6A3、SNAI2)、糖酵解(ENO1)和缺氧(CAV1)通路，其中CAV1、DDIT3等8个基因在TCGA队列中与患者不良预后显著相关(HR>2, _P<0.05)。

讨论部分指出，该研究首次建立PM-EVs转录组图谱，揭示EVs可能通过传递S表型基因重塑肿瘤微环境。GAS5等lncRNA和COL6A3等EMT相关基因兼具诊断与治疗靶点潜力。局限在于样本量较小且缺乏肉瘤样亚型，但采用原代细胞较好保留了肿瘤异质性。未来扩大临床验证后，PM-EVs标志物有望实现三大突破：(1)弥补现有血清标志物敏感度不足的缺陷；(2)通过S/E标志物比例预测肿瘤侵袭性；(3)为靶向EV分泌的疗法提供新靶点。论文为PM液体活检开辟了新方向，相关发现已申请国际专利。