创新联合检测策略:精准识别福寿螺体内广州管圆线虫幼虫的高效之道

【字体: 时间:2025年02月10日 来源:Parasites & Vectors 3

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  为解决广州管圆线虫(Angiostrongylus cantonensis)幼虫检测问题,研究人员开展了对福寿螺(Achatina fulica)体内该幼虫检测方法的研究。结果显示联合检测法阳性检出率和灵敏度更高。这一成果对监测螺类感染、防控疾病有重要意义。

  在神秘的寄生虫世界里,有一种名为广州管圆线虫(Angiostrongylus cantonensis)的家伙,它可是让公共卫生专家们头疼不已。这种寄生虫能引发嗜酸性粒细胞性脑膜脑炎等疾病,严重威胁人类健康。人们一旦误食含有其第三期幼虫的中间宿主(如福寿螺 Achatina fulica、南美螺 Pomacea canaliculata )、转续宿主(像青蛙、螃蟹等),或者食用被污染的农产品、水果、饮用水,就可能被感染。福寿螺不仅是 “农田杀手”,破坏生态平衡,还因其繁殖能力强、适应力好,广泛分布于多个国家和地区,成为传播广州管圆线虫的 “帮凶”。在中国,不少地区都发现了自然感染广州管圆线虫的福寿螺和南美螺,再加上一些人有食用螺肉的习惯,感染风险大大增加。
目前,检测中间宿主蜗牛体内广州管圆线虫幼虫的方法各有优缺点。传统的肺检法(lung microscopy)操作简单、成本低,适合大规模现场筛查,但它对检测人员的专业要求高,遇到早期感染或感染程度较低的情况,很容易漏检。而分子生物学检测技术,像聚合酶链式反应(PCR)、实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)等,虽然检测效率和灵敏度高,可它们需要特定的仪器设备,检测成本也高,更适合在实验室使用。因此,寻找一种既经济又高效、灵敏的检测方法迫在眉睫。

为了解决这个难题,大理州血吸虫病防治研究所和中国疾病预防控制中心的研究人员携手开展了一项重要研究。他们想比较肺检法、PCR 和 AcanITS1 qPCR 这三种方法检测福寿螺体内广州管圆线虫幼虫的效果,还尝试将肺检法和 AcanITS1 qPCR 联合起来,看看这种新方法是否能带来惊喜。最终,他们的研究成果发表在了《Parasites & Vectors》杂志上。

研究人员用到的主要关键技术方法有:从海南儋州采集 348 份福寿螺样本;运用肺检法,解剖福寿螺,观察其肺囊内是否有幼虫结节,再对结节进行按压,在显微镜下查看幼虫形态;用 PCR 和 AcanITS1 qPCR 技术,分别按照特定的反应体系和扩增条件,对提取的福寿螺肺囊模板 DNA 进行检测,最后通过统计分析比较不同检测方法的效果 。

下面来看看具体的研究结果:

  • 肺检法观察到的虫体形态:在显微镜下,广州管圆线虫第三期幼虫无色透明,有两层体鞘,头部钝圆,尾部突然变细,头部还有两根几丁质杆,这些特征和以往的描述相符。
  • PCR 扩增和序列比对:PCR 成功扩增出预期大小为 693bp 的 ITS1 基因片段,经过比对,和广州管圆线虫的序列相似度极高。
  • AcanITS1 qPCR 检测结果:阳性样本有明显的扩增曲线,平均 Ct 值为 24.21,阴性样本则没有。
  • 不同检测方法效果比较:肺检法、PCR、AcanITS1 qPCR 和联合检测的阳性检出率分别为 29.31%、32.18%、38.22% 和 38.51% ,差异有统计学意义。以 PCR 为金标准,肺检法、AcanITS1 qPCR 和联合检测的灵敏度分别为 88.39%、97.32% 和 98.21%,特异性分别为 98.73%、89.83% 和 89.83%。另外,PCR 和 AcanITS1 qPCR 的检测限分别为 10ng/μl 和 10pg/μl ,AcanITS1 qPCR 灵敏度更高。

研究结论和讨论部分意义重大。研究发现,联合检测法在阳性检出率和灵敏度方面,都比单一检测方法更胜一筹。这意味着在中间宿主自然感染率较高的地区,联合检测能大幅提高检测的准确性,还能降低检测成本,因为只需要对肺检法阴性的样本进行 AcanITS1 qPCR 检测就行。不过,研究也存在局限性,在一些国家,有多种广州管圆线虫科的寄生虫会感染软体动物,仅靠肺检法的显微镜观察很难精确区分,所以该研究方法还需要在其他国家进一步验证。但总体来说,这项研究为监测福寿螺和南美螺等中间宿主感染广州管圆线虫幼虫提供了新的思路和方法,对防控食源性寄生虫病、保障公众健康有着重要的意义。
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