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为探究神经肽 S（NPS）- 神经肽 S 受体（NPSR）在哮喘发病机制中的作用，研究发现其通过调节 TFEB 自噬轴加重哮喘，或为治疗新靶点。
哮喘是一种常见的呼吸道疾病，全球有超过 3 亿人受其困扰，给社会经济带来了沉重负担。目前的治疗手段，如吸入皮质醇、长效 β 受体激动剂（LABAs）等，大多只能缓解症状，无法根治。这就像给哮喘这头 “猛兽” 套上了一个暂时的 “枷锁”，但并不能真正制服它。因此，深入探究哮喘的发病机制，寻找新的治疗靶点迫在眉睫。
江南大学无锡医学院等机构的研究人员开展了相关研究，发现神经肽 S（NPS）及其受体 NPSR 通过调节转录因子 EB（TFEB）依赖的自噬轴加重哮喘，这为哮喘的治疗提供了潜在的新靶点。该研究成果发表在《Respiratory Research》上。
在研究过程中，研究人员用到了多种关键技术方法。他们构建了卵清蛋白（OVA）和木瓜蛋白酶诱导的哮喘小鼠模型，模拟哮喘发病情况；通过转录组测序分析基因表达变化；运用蛋白质免疫印迹（Western blotting）检测蛋白表达水平；采用免疫荧光分析观察细胞内蛋白定位和表达变化 。
下面来看看具体的研究结果。
- NPS 和其受体 NPSR 在哮喘疾病中过表达：研究人员通过构建 OVA 和木瓜蛋白酶诱导的哮喘小鼠模型，发现哮喘小鼠肺组织中 NPS-NPSR 的 mRNA 和蛋白水平均升高，且 NPSR 主要在支气管上皮细胞中表达。同时，分析 GEO 数据库中的数据集 GSE37693 发现，IL-13 刺激的人原代气道上皮细胞中 NPSR mRNA 水平也更高。这表明 NPS-NPSR 的激活与哮喘密切相关。
- NPSR 基因敲除缓解哮喘和气道炎症：研究人员构建了 NPSR 基因敲除小鼠，并建立了 OVA 和木瓜蛋白酶诱导的哮喘模型。结果显示，NPSR 基因敲除小鼠的病理损伤和炎症浸润明显减轻，肺泡灌洗液中的蛋白水平、细胞计数以及嗜酸性粒细胞百分比降低，肺组织中 IL-4、IL-5、IL-13、MUC5AC 和 TSLP 等哮喘相关因子的 mRNA 水平下降，BALF 中的 Th2 细胞因子水平和血清 IgE 产生也显著减少。转录组分析和基因富集分析（GSEA）进一步表明 NPSR 参与调节哮喘。
- NPSR 的激活通过调节自噬影响气道炎症：对转录组测序数据进行 GO 和 KEGG 分析发现，炎症细胞因子和自噬途径被富集，且 NPSR 与自噬密切相关。研究人员检测了不同组小鼠肺组织中自噬相关基因的表达，结果显示，OVA 和木瓜蛋白酶诱导的小鼠中，ATG5、LC3II 和 Beclin-1 表达增加，P62 表达减少，而 NPSR 基因敲除抑制了这些变化。这表明 NPSR 可能通过调节自噬过程促进哮喘发展。
- NPS-NPSR 在哮喘过程中促进支气管上皮细胞的自噬：免疫荧光分析显示，NPSR 基因敲除小鼠支气管上皮细胞中 LC3 表达明显下调。体外实验中，用 OVA 处理支气管上皮细胞系（Beas-2b 细胞），并分别给予生理盐水、外源性 NPS 或 NPSR 阻断剂 SHA68 处理，结果发现，OVA 促进自噬相关蛋白表达，外源性 NPS 进一步上调这些蛋白，而 SHA68 则使其下调。免疫荧光染色也证实了这一结果。
- TFEB 在 NPS-NPSR 调控的 Beas-2b 细胞中被激活：TFEB 是自噬过程的主要调节因子，与哮喘疾病有关。研究人员发现，用 NPS 处理 Beas-2b 细胞后，TFEB 的 mRNA 水平显著增加，OVA 处理可增加其蛋白表达和核转运，外源性 NPS 使其加剧，而 SHA68 则阻断这一过程。共聚焦显微镜观察也显示了类似结果。
- TFEB 沉默减少 NPS 诱导的 Beas-2b 细胞自噬和哮喘细胞因子的释放：研究人员转染 TFEB siRNA 沉默 Beas-2b 细胞中的 TFEB，结果发现，沉默 TFEB 可显著降低 NPS 刺激引起的自噬相关基因的过表达，减少 LC3 定位信号，降低哮喘细胞因子 IL-25、IL-33 和 TSLP 的释放。此外，在不同处理组中，siTFEB 有效降低了 OVA 诱导的自噬，且不同处理组之间炎症因子水平无显著差异，这表明 TFEB 是 OVA-NPS-NPSR 信号轴中导致炎症的关键下游效应因子。
- Prkcg 介导的 TFEB 途径参与 NPS-NPSR 调节的哮喘：对转录组测序数据进一步分析发现，在木瓜蛋白酶和 OVA 诱导的哮喘模型中，蛋白激酶 γ（Prkcg）均显著上调。体外实验显示，外源性 NPS 处理降低 Prkcg 的 mRNA 和蛋白水平，而 SHA68 处理则使其升高。体内实验表明，NPSR 基因敲除小鼠肺组织中 Prkcg 表达较高，TFEB 表达较低。
综合研究结论和讨论部分，该研究首次明确了 NPS-NPSR 在哮喘中的作用机制。NPS-NPSR 在支气管上皮细胞中的表达增加，通过激活 TFEB 介导的自噬促进哮喘发展，而 Prkcg 可能是调节这一过程的关键上游靶点。这一发现为哮喘的治疗提供了新的潜在靶点，有望开发出更有效的治疗方法，为众多哮喘患者带来新的希望。不过，目前的研究仍存在一些局限性，未来还需要进一步深入研究，以更好地理解哮喘的发病机制，推动哮喘治疗领域的发展。
