重大发现！泰国蝙蝠寄生软蜱 Reticulinasus sp. 线粒体基因组特征解析及其潜在影响

为解决泰国蝙蝠蜱虫研究匮乏的问题，朱拉隆功大学的研究人员开展对蝙蝠寄生 Reticulinasus sp. 线粒体基因组的研究，发现该蜱虫感染两种蝙蝠，线粒体基因组与 R. faini 相似。此研究为蜱虫研究和人畜共患病防控提供关键依据，值得一读。

　　

泰国朱拉隆功大学（Chulalongkorn University）的研究人员 Siwaporn Tuangpermsub、Apinya Arnuphapprasert 等人在《Parasites & Vectors》期刊上发表了题为 “Mitochondrial genome characterization of a Reticulinasus sp. (Argasidae: Ornithodorinae) parasitizing bats in Thailand” 的论文。这篇论文在蜱虫与蝙蝠相关研究领域意义重大，为了解泰国蝙蝠蜱虫的种类、分布以及它们在人畜共患病传播中的潜在作用提供了关键信息，也为后续相关研究奠定了重要基础。

研究背景

蜱虫（Acari: Ixodida）是重要的吸血外寄生虫，也是众多病原体的传播媒介，在人类疾病传播方面仅次于蚊子，在动物病原体传播中更是占据主要地位。全球已知蜱虫至少有 960 种，分属于硬蜱科（Ixodidae）、软蜱科（Argasidae）和纳氏蜱科（Nuttalliellidae） 。其中，软蜱的分类一直存在争议，其多样性也尚未完全明确。

蝙蝠作为多种传染病病原体的宿主，身上寄生着多种吸血节肢动物，包括蜱虫。软蜱的生态行为多样，它们不仅栖息在洞穴、巢穴等地方，还会出现在人类住所。这种与人类和其他动物共享栖息地的特性，使得软蜱极有可能成为多种病原体的传播媒介，例如鸟蜱属（Ornithodoros）和锐缘蜱属（Argas）的蜱虫能传播疏螺旋体（Borrelia sp.），引发人类复发性发热；匈牙利和中国在蝙蝠蜱（Argas vespertilionis）中检测到了巴贝斯虫（Babesia vesperuginis） ；多个地区在软蜱的不同属中发现了立克次氏体（Rickettsia spp.） 。

在东南亚地区，虽然有研究关注该区域岛国的软蜱，但泰国的蝙蝠蜱虫及其相关蝙蝠种类研究却十分有限。泰国拥有丰富的蝙蝠资源，已知至少有 148 种蝙蝠，占全球蝙蝠种类近 10%。因此，开展对泰国蝙蝠相关蜱虫的研究迫在眉睫。

研究方法

1. 蝙蝠捕捉与蜱虫采集：研究人员在 2018 年 2 月至 2023 年 2 月期间，利用雾网、隧道网、竖琴陷阱和手网等工具，在泰国 5 个地理区域的 10 个省份捕捉蝙蝠。捕获后，将蝙蝠放入单独布袋，记录相关信息后检查体外寄生虫，用细镊子收集蜱虫，保存在 70% 或无水乙醇中，带回实验室后存放在 - 40°C 冰箱备用。
2. 蜱虫鉴定：运用 Olympus SZ61 体视显微镜、Nikon Upright Microscope ECLIPSE Si RS 显微镜和 JEOL JSMIT300 扫描电子显微镜对蜱虫进行形态学观察，依据鉴定手册确定其阶段和种类。之后，提取蜱虫 DNA，通过聚合酶链反应（PCR）扩增蜱虫 16S 线粒体基因片段，进行测序和比对，利用 GenBank 数据库初步鉴定蜱虫所属属或种。
3. 线粒体基因组测序与分析：以公共数据库中蜱虫线粒体基因组序列为模板设计引物，经两轮 PCR 扩增获得蜱虫完整线粒体基因组序列。对序列进行编辑、组装和注释，运用多种软件进行比对、翻译和分析，构建系统发育树，确定蜱虫的系统发育位置。同时，计算蜱虫感染率、平均多度和平均强度。

研究结果

1. 蝙蝠捕获与蜱虫感染率：研究期间，在泰国 25 个采样点共捕获 1031 只蝙蝠，分属 7 个科、11 个属和 28 个种。其中，34 只（3.30%）蝙蝠感染软蜱，仅在凹脸蝠（Craseonycteris thonglongyai ）和大长舌果蝠（Eonycteris spelaea）这两种蝙蝠身上发现了蜱虫。凹脸蝠感染率为 23.74%（33/139），大长舌果蝠感染率为 50%（1/2）。在各采样点中，来自北碧府（Kanchanaburi）Manow Phee Cave 的凹脸蝠感染率、平均多度和平均强度最高。多数蜱虫在旱季采集到，少数在雨季采集到。
2. 基于形态和核苷酸序列的物种鉴定：从蝙蝠宿主上采集的 96 只蜱虫均为软蜱幼虫，体长 0.8 - 1.5mm，多为饱血状态。通过显微镜观察到幼虫口下板特征，扫描电镜下可见其背板、刚毛和哈勒氏器等结构特征。对 13 只蜱虫的线粒体 16S rRNA 和 cox1 基因测序后，经 BLASTN 和 BOLD 数据库比对分析，发现其与赞比亚的 R. faini 相似度极高。
3. 序列分析、线粒体基因组注释和系统发育分析：研究获得的 13 个 16S rRNA 序列仅有两种单倍型。来自凹脸蝠和大长舌果蝠的软蜱线粒体基因组大小分别为 14,433bp 和 14,439bp，AT 含量分别为 75.99% 和 76.08%。两个线粒体基因组均包含 13 个蛋白质编码基因、22 个 tRNA 基因和 2 个 rRNA 基因。系统发育分析表明，研究中的蜱虫样本位于 Reticulinasus 分支内，与南非的 R. faini 紧密聚类。

研究结论与讨论

研究首次在泰国的凹脸蝠和大长舌果蝠身上发现蜱虫感染，这是泰国蝙蝠软蜱的首次记录。线粒体基因组序列分析显示，这些蜱虫与 R. faini 相似度最高，而 R. faini 已知可能是人畜共患病病原体的传播媒介，这一发现为研究泰国蝙蝠相关蜱虫种类和分布提供了重要依据，也提示了其在人畜共患病传播中的潜在风险。

在研究中，仅两种蝙蝠被发现感染蜱虫，这或许暗示该蜱虫存在宿主偏好。大长舌果蝠栖息环境多样，常靠近洞穴入口栖息，增加了接触软蜱的机会；凹脸蝠此前未被报道有蜱虫感染，此次研究填补了这一空白。由于采集的蜱虫均为幼虫，仅依靠形态学特征难以准确鉴定物种，虽其形态特征与 R. faini 相似，但部分特征又不完全符合。

分子分析为物种鉴定提供了关键支持，16S rRNA BLASTN 和 cox1 BOLD 分析显示与 R. faini 相似度较高，但由于蜱虫处于幼虫阶段，且公共数据库中蜱虫完整线粒体序列匮乏，近缘物种参考序列缺失，使得准确鉴定物种仍面临挑战。即便如此，该研究成功扩增出泰国蝙蝠相关软蜱的完整线粒体基因组，为后续研究提供了重要的数据基础。未来研究可进一步扩大样本量，涵盖更多蝙蝠种类和地理区域，深入探究蜱虫与蝙蝠的关系以及蜱虫传播病原体的情况，为预防和控制人畜共患病提供有力支持。