人骨髓中新型SSchiCD66b?中性粒细胞定向祖细胞（NCP5s/NCP6s）的发现及其在慢性髓系白血病中的病理意义

本研究通过流式细胞术和转录组分析，鉴定了人骨髓中两种新型SSchiCD66b?中性粒细胞定向祖细胞（NCP5s/NCP6s），揭示了其位于NCP4s与早幼粒细胞之间的分化层级，并发现慢性髓系白血病（CP-CML）患者骨髓中NCP4s/NCP6s异常扩增。该研究填补了中性粒细胞早期分化轨迹的空白，为髓系恶性肿瘤的病理机制提供了新视角。

　　

中性粒细胞作为先天免疫系统的核心效应细胞，其生成过程（neutropoiesis）的早期调控机制一直是血液学领域的未解之谜。传统观点认为，中性粒细胞分化遵循严格的层级模式，但近年单细胞技术揭示其可能呈现连续性分化特征。尽管已有研究报道了CD66b⁺前体细胞（如ProNeus、eNePs），但最早期的CD66b^?定向祖细胞仍缺乏明确表征。此外，慢性髓系白血病（CML）等髓系恶性肿瘤中中性粒细胞异常增殖的细胞起源尚未阐明。

意大利维罗纳大学（University of Verona）病理学系Marco A. Cassatella团队在《Cellular & Molecular Immunology》发表最新研究，通过多参数流式分选结合RNA测序技术，首次鉴定了人骨髓中两类SSc^hiCD66b^?中性粒细胞定向祖细胞（NCP5s/NCP6s），并揭示其在CP-CML病理过程中的特异性扩增现象。

关键技术包括：1）从健康供体和CP-CML患者骨髓中分离低密度细胞进行18色流式分析；2）基于CD34/CD45RA/CD66c等标记物的荧光激活细胞分选（FACS）；3）体外MS-5基质细胞共培养体系评估分化潜能；4）批量RNA测序（RNA-seq）和PCA聚类分析；5）免疫组织化学验证临床样本中NCPs的分布特征。

研究结果

新型SSc^hiNCPs的鉴定

通过CD64^dimCD115^?CD117⁺CD71^hi表型筛选，发现SSc^hiCD66b^?群体可进一步分为CD45RA⁺NCP5s和CD45RA^?NCP6s（图1A）。形态学显示其具有偏心核和异质性颗粒（图1C），转录组分析证实其介于NCP4s与早幼粒细胞（PMs）之间（图4A）。

分化潜能验证

体外实验表明NCP5s/NCP6s可分化为CD66b⁺成熟中性粒细胞（图3C），其中NCP6s生成 segmented neutrophils（SNs）的效率显著高于NCP5s（图3D）。值得注意的是，NCP5s在GM-CSF刺激下主要分化为髓系细胞（图S2B），证实其谱系定向性。

颗粒蛋白表达特征

RNA-seq显示NCP5s/NCP6s高表达α-防御素（DEFA1/3）和弹性蛋白酶（ELANE）（图5B），免疫染色证实35% NCP6s已表达α-防御素（图5D），提示其处于AG（嗜天青颗粒）合成激活阶段。

CML病理关联

CP-CML患者骨髓中NCP4s/NCP6s频率显著增加（图7C），且与cMoPs（共同单核祖细胞）减少形成对比（图7E）。组织学观察到NCP4s/NCP6s形成病理簇（图7G），暗示其在BCR-ABL驱动下的异常扩增。

结论与意义

该研究构建了更完整的中性粒细胞分化模型（图8）：NCP1s→NCP4s→NCP6s与NCP2s→NCP3s→NCP5s→NCP6s两条路径最终汇入PMs。首次证实CD45RA表达下调伴随CD66c上调是中性粒细胞成熟的关键标志。临床样本分析揭示NCP4s/NCP6s可能是CML中性粒细胞过度生成的源头靶点，为开发特异性治疗策略提供新思路。

研究创新性体现在：1）填补SSc^loNCPs与CD66b⁺前体细胞间的知识断层；2）建立NCPs与髓系恶性肿瘤的直接关联；3）提出颗粒蛋白合成时序可作为中性粒细胞分化阶段的分子标尺。这些发现对理解髓系造血失调机制具有重要理论价值。