乐伐替尼通过抑制EGFR/ERK/P38/NF-κB信号通路增强膀胱癌细胞对顺铂敏感性的机制研究

本研究针对膀胱癌(BC)治疗中EGFR信号持续激活导致的顺铂耐药问题，探讨了多激酶抑制剂乐伐替尼(Lenvatinib)的协同治疗机制。研究人员通过体外实验和动物模型证实，乐伐替尼能显著抑制EGFR/ERK/P38/NF-κB信号通路，下调抗凋亡因子(MCL-1/c-FLIP/XIAP)和EMT相关蛋白(Twist/Snail-1/ZEB-1/ZEB-2)，同时激活caspase依赖的凋亡途径，使BC细胞对顺铂的敏感性提高2.46-4.74倍。该研究为克服膀胱癌化疗耐药提供了新的联合治疗策略。

　　

膀胱癌作为最常见的泌尿系统恶性肿瘤，其治疗面临两大难题：一是EGFR信号通路的持续激活会导致肿瘤进展和化疗耐药；二是标准治疗药物顺铂虽能杀伤癌细胞，却同时激活NF-κB等促生存信号，形成"治疗抵抗"的恶性循环。这种矛盾现象严重制约了膀胱癌患者的治疗效果，亟需开发能阻断耐药信号的新型辅助药物。

中国台湾卫生福利部桃园医院泌尿外科的研究团队在《Cancer Cell International》发表的研究中，创新性地将抗血管生成药物乐伐替尼应用于膀胱癌治疗。这种多激酶抑制剂原本用于肝癌和甲状腺癌，但其对EGFR等酪氨酸激酶的潜在抑制作用尚未在膀胱癌中探索。研究人员通过系统的体外和体内实验证实，乐伐替尼能像"分子开关"一样关闭EGFR及其下游的ERK/P38/NF-κB信号通路，同时恢复癌细胞对顺铂的敏感性。

研究主要采用四种关键技术：MTT法检测药物协同效应、流式细胞术分析凋亡途径、蛋白质印迹(Western blotting)追踪信号通路变化，以及MB49小鼠移植瘤模型验证体内疗效。其中，通过构建TSGH-8301/NF-κB-luc2报告基因细胞系，直观展示了乐伐替尼对NF-κB活性的抑制作用。

毒性评估与协同效应

MTT实验显示乐伐替尼对T24、TSGH-8301和MB49细胞的IC₅₀为10-13μM。当与2μM顺铂联用时，协同指数(CI)小于1，癌细胞存活率从95%降至60%。流式细胞术证实乐伐替尼能同时激活死亡受体途径(FAS/FAS-L/caspase-8)和线粒体途径(ΔΨm/caspase-9)，使凋亡率提升3-5倍。

信号通路调控机制

Western blotting揭示乐伐替尼可抑制EGF诱导的EGFR(Tyr¹⁰⁶⁸)磷酸化。在顺铂刺激下，乐伐替尼使p-ERK/p-P38/p-NF-κB表达量下降60-80%。免疫荧光显示NF-κB核转位被显著抑制，这与PD98059(ERK抑制剂)和SB203580(P38抑制剂)的效果相当。

转移与抗凋亡调控

Transwell实验表明20μM乐伐替尼使癌细胞迁移/侵袭能力降低70%。分子水平上，乐伐替尼上调E-cadherin，下调N-cadherin/MMP9，并显著抑制Twist/Snail-1/ZEB-1/ZEB-2等EMT转录因子。同时，抗凋亡蛋白MCL-1、c-FLIP和XIAP的表达量减少50-75%。

体内疗效验证

在MB49移植瘤模型中，10mg/kg乐伐替尼使肿瘤生长延迟23.73天，抑制率达4.74倍。免疫组化证实治疗组肿瘤组织内p-EGFR/p-ERK信号减弱，caspase-3活化增强。重要的是，血清肝肾功能指标和主要脏器病理检查均未发现明显毒性。

这项研究首次阐明乐伐替尼通过"三重机制"增强膀胱癌治疗效果：直接抑制EGFR信号枢纽、阻断EMT进程、重启凋亡程序。特别值得注意的是，乐伐替尼在逆转顺铂耐药的同时，不会增加治疗毒性，这种"增效不增毒"的特性使其具有显著的临床转化价值。该发现不仅为膀胱癌联合治疗提供了新方案，也为多激酶抑制剂的适应症拓展提供了理论依据。研究揭示的EGFR/ERK/P38/NF-κB信号轴可作为预测乐伐替尼疗效的生物标志物，为后续个体化治疗研究指明了方向。