孟鲁司特钠对牛呼吸道合胞病毒复制的抑制作用：一种用于药物重定位研究的体外替代模型

本研究针对流行病/大流行期间药物重定位的临床需求，开发了模拟人传人传播的体外连续传代模型，评估了哮喘治疗药物孟鲁司特钠(MLS)对牛呼吸道合胞病毒(BRSV)的抗病毒效果。研究发现MLS在10μM和20μM浓度下可抑制99%的病毒复制，显著降低病毒载量(TCID50)，同时改善细胞存活率。该研究为RSV感染治疗提供了新的潜在药物选择，并为突发传染病药物重定位研究提供了方法学参考。

　　

呼吸道病毒感染一直是全球公共卫生的重大挑战，近年来随着人口密度增加和气候变化，埃博拉、寨卡病毒、中东呼吸综合征冠状病毒(MERS-CoV)等新发传染病不断出现。特别是在COVID-19大流行期间，人们深刻认识到快速开发抗病毒药物的紧迫性。然而，传统药物研发周期长、成本高，难以应对突发疫情。在这种背景下，药物重定位(repurposing)策略因其可缩短研发时间、降低风险而备受关注。其中，孟鲁司特钠(Montelukast sodium, MLS)作为一种已获FDA批准用于哮喘治疗的白三烯受体拮抗剂，因其潜在的抗炎和抗病毒特性成为研究热点。

土耳其昂杜库兹·迈伊斯大学兽医学院病毒学系的研究人员开展了一项创新性研究，他们建立了一种模拟流行病传播的体外连续传代模型，评估了MLS对牛呼吸道合胞病毒(BRSV)的抗病毒效果。BRSV与人呼吸道合胞病毒(HRSV)同属肺炎病毒科(Pneumoviridae)，具有高度遗传和抗原相似性，是研究HRSV的理想替代模型。该研究论文发表在《Virology Journal》上。

研究人员主要采用了以下关键技术方法：通过台盼蓝染色法评估细胞毒性确定MLS的安全浓度范围；建立连续10代的体外传代模型模拟病毒传播；采用TCID₅₀法测定病毒滴度；通过巢式RT-PCR和qPCR定量病毒载量；应用Hoechst 33342/碘化丙啶双染法分析细胞凋亡和坏死；使用Griess试剂检测一氧化氮(NO)水平。

研究结果显示，在细胞毒性方面，10μM和20μM的MLS处理使MDBK细胞活力保持在89.2%和87.3%，显著高于更高浓度组。在抗病毒效果方面，MLS表现出剂量依赖性抑制作用，20μM MLS处理组的病毒滴度(TCID₅₀)在第十代时降至1.0×10⁴，相比未处理组(2.99×10⁶)降低了2个数量级。qPCR检测显示病毒拷贝数减少了99.94%，巢式RT-PCR也证实了病毒RNA的显著减少。

在细胞保护作用方面，20μM MLS处理显著降低了病毒感染诱导的细胞凋亡(从37%降至18.66%)和坏死(从42%降至37%)，同时提高了活细胞比例(从21%增至40%)。有趣的是，MLS还表现出对一氧化氮(NO)产生的调节作用，而NO是NF-κB通路活化的标志物之一。

研究结论指出，MLS通过多重机制发挥抗BRSV作用：直接破坏病毒完整性，抑制病毒复制；调节宿主免疫反应，减轻炎症损伤；保护上皮细胞免受病毒诱导的死亡。这些发现不仅为RSV感染治疗提供了新的潜在药物选择，更重要的是建立了一种可用于快速评估抗病毒药物的体外传代模型，为应对未来可能的呼吸道病毒疫情提供了方法学工具。

该研究的创新点在于首次将BRSV作为HRSV研究的替代模型，并系统评估了MLS的抗病毒效果。研究人员特别强调，这种体外连续传代模型可以模拟病毒在人群中的传播过程，为药物重定位研究提供了更接近真实世界的实验体系。虽然MLS的临床抗病毒效果仍需进一步验证，但这项研究为开发广谱抗呼吸道病毒药物提供了重要线索，特别是在突发公共卫生事件中，这种"老药新用"的策略可能成为挽救生命的关键。