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为解决 CMT2S 治疗难题，美国 Vanda Pharmaceuticals Inc. 的研究人员开展 ASO 治疗 CMT2S 的研究。结果显示 VCA - 894A 可恢复 IGHMBP2 水平，改善神经肌肉功能且安全性良好。该研究为 CMT2S 治疗带来新希望，值得科研读者一读。
在医学的神秘世界里，有一种疾病如同隐藏在暗处的 “小怪兽”，给患者带来诸多痛苦，它就是夏科 - 马里 - 图斯病 2S 型（Charcot - Marie - Tooth disease type 2S，CMT2S）。这是一种遗传性的周围神经系统疾病，全球每百万人中患病的人数不到 1 人。患者常常会出现肌肉萎缩、无力的症状，就像身体里的 “小马达” 逐渐失去动力，连简单的跑步、跳跃都难以完成，严重影响生活质量。而且，由于这种疾病具有高度的遗传和等位基因异质性，诊断和治疗都面临着巨大的挑战，目前还没有能够根治的方法。
免疫球蛋白 μ 结合蛋白 2（Immunoglobulin mu - binding protein 2，IGHMBP2）的致病性变异是导致 CMT2S 的重要原因之一。当 IGHMBP2 基因出现问题时，会影响 mRNA 的代谢和 RNA 的加工，进而导致 α - 运动神经元变性，引发疾病。此前，虽然对这种疾病有了一定的认识，但如何有效治疗 CMT2S，一直是困扰医学界的难题。
为了攻克这个难题，来自美国 Vanda Pharmaceuticals Inc. 的 Sandra Smieszek 等人展开了深入研究，并在《Molecular Therapy: Nucleic Acids》期刊上发表了题为 “Potential ASO - based personalized treatment for Charcot - Marie - Tooth disease type 2S” 的论文。他们发现，一种名为 VCA - 894A 的反义寡核苷酸（Antisense oligonucleotides，ASO）有望成为治疗 CMT2S 的新希望，这一发现为 CMT2S 的治疗开辟了新的道路。
研究人员在这项研究中用到了几个关键技术方法。首先是全基因组测序技术，通过它来确定患者的基因变异情况；然后是 ASO 设计技术，针对患者特定的基因变异设计出能与之相互作用的 ASO；细胞培养技术也很关键，培养患者的成纤维细胞等细胞来进行后续实验；还有基因表达分析技术，用于检测相关基因的表达水平变化；最后利用神经肌肉接头（Neuromuscular Junction，NMJ）平台技术，评估 NMJ 的功能。
下面来详细看看他们的研究结果：
- 患者情况描述：研究人员对一名 11 岁就被诊断为 CMT2S 的患者进行了长期观察。11 岁时，患者行走困难、经常摔倒，精细运动也受到影响。到了 19 岁，虽然在他人帮助下能走几步，但肌肉无力的情况依然严重。不过，她凭借顽强的毅力，学会了照顾自己、开车，还完成了高中学业。
- 患者体内的 IGHMBP2 变异：通过全基因组测序分析，研究人员确认了患者体内存在 IGHMBP2 基因的变异。父亲遗传的基因中有一个位于内含子 8 的隐秘剪接位点变异（c.1235 + 894C>A），这个变异会导致异常转录本产生，进而引发无义介导的衰变（Nonsense - Mediated Decay，NMD），使得 IGHMBP2 蛋白水平降低。母亲遗传的基因则携带一个错义变异（p.Leu577Pro）。这些变异共同作用，导致患者体内的 IGHMBP2 蛋白水平明显下降。
- ASO 的细胞进入效率和细胞活力：研究人员设计了多种针对内含子 8 变异区域的 ASO，其中 VCA - 894A 是重点研究对象。它是一种经过化学修饰的 19 聚体 ASO，带有硫代磷酸酯和 2'- 甲氧基乙基（2'-MOE）骨架。通过实验发现，这种 ASO 能够成功进入患者的成纤维细胞，并且细胞活力不受影响，这为后续的治疗研究奠定了基础。
- ASO 治疗增加 IGHMBP2 的 mRNA 水平：用 VCA - 894A 处理患者的成纤维细胞 48 小时后，惊喜的事情发生了！IGHMBP2 的表达水平相较于未处理的对照组提高了约 1.88 倍，几乎恢复到了正常水平。qPCR 和 RNA 测序结果也进一步证实，VCA - 894A 能够有效提高恢复的野生型转录本与含隐秘外显子转录本的比例，是恢复转录水平的优质候选 ASO。
- VCA - 894A 恢复 IGHMBP2 的蛋白水平：研究人员将患者的成纤维细胞重编程为诱导多能干细胞（induced pluripotent stem cells，iPSCs），并分化为运动神经元（Motor Neurons，MNs）。用 VCA - 894A 处理成纤维细胞 72 小时后，发现 IGHMBP2 蛋白水平显著增加了约 50% - 70%。通过 Western blot 分析也证实了这一结果，说明 VCA - 894A 不仅能提高 mRNA 水平，还能有效恢复蛋白水平。
- VCA - 894A 的脱靶结合情况：ASO 的脱靶结合可能会带来副作用和毒性，所以研究人员通过计算机模拟分析，对 VCA - 894A 在人类和大鼠基因组中的潜在脱靶结合位点进行了研究。结果发现，VCA - 894A 在人类转录组中几乎没有脱靶匹配，直到允许 4 个错配时才出现，这表明它的脱靶结合风险较低，安全性相对较高。
- CMT2S - MNs 的形态和生理特征：研究人员将患者来源的 iPSC - MNs 与健康对照的 iPSC - MNs 进行对比。发现患者的 MNs 轴突更细，并且有更多的膨体，这可能会影响轴突的传导和传递。在电生理特征方面，早期的 CMT2S - MNs 有轻微的超兴奋性，但到了后期，整体功能出现衰退，这与患者的临床症状变化相吻合。
- IGHMBP2 变异导致的 CMT2S 的 NMJ 功能评估：研究人员利用 Hesperos Inc. 建立的 NMJ 平台，对表达 CMT2S IGHMBP2 变异的 MNs 进行研究。结果发现，与健康对照组相比，CMT2S 患者的 NMJ 数量在早期和后期都有明显差异，疲劳指数（Fatigue Index，FI）更高，并且在测试中表现出快速疲劳和混乱的破伤风反应。这进一步揭示了 CMT2S 患者神经肌肉功能的异常。
- VCA - 894A 在 NMJ 系统中的给药效果：研究人员在 NMJ 系统中对 VCA - 894A 进行给药实验，设置了不同的剂量组和对照组。结果显示，VCA - 894A 能够增强现有 NMJ 的功能，改善新发育 NMJ 的缺陷，恢复当前稳定 NMJ 的功能，还能改善破伤风反应，使骨骼肌收缩时间更长。而且，VCA - 894A 对 NMJ 的数量、形成和稳定性都没有负面影响。
- 三个月大鼠毒理学研究：为了评估 VCA - 894A 的安全性，研究人员对 80 只野生型 Sprague - Dawley 大鼠进行了为期 3 个月的鞘内注射实验。结果发现，在所有测试剂量下，VCA - 894A 都能被很好地耐受，没有出现计划外死亡。虽然在高剂量（0.35mg）时出现了一些短暂的临床症状和轻微的病理变化，但这些都被认为是非不良反应，未观察到不良反应的剂量水平（NOAEL）为 0.35mg / 剂量，这为后续的临床应用提供了重要的安全性数据。
综合这些研究结果，研究人员认为，VCA - 894A 这种 ASO 在体外实验中成功地恢复了 IGHMBP2 的蛋白水平，并且在改善 CMT2S 患者的神经肌肉功能方面表现出了巨大的潜力。同时，大鼠毒理学研究也表明它具有较好的安全性，为进一步的临床应用提供了有力的支持。
这项研究意义重大。它为 CMT2S 患者带来了新的希望，有可能改变目前无有效治疗方法的困境。同时，这种基于 ASO 的个性化治疗方法，也为其他罕见遗传疾病的治疗提供了新的思路和方向。随着研究的不断深入，相信未来会有更多的患者受益于这些研究成果，摆脱疾病的困扰。
