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为解决卵巢癌（OC）预后差、机制不明的问题，研究人员开展 TAM 衍生外泌体 miR - 589 - 3p 对 OC 影响的研究，发现其可促 OC 进展。该研究为 OC 治疗提供新靶点，极具科研价值，推荐一读。
在女性健康的 “战场” 上，卵巢癌（OC）可谓是一个极其凶悍的 “敌人”。它是妇科恶性肿瘤中的 “狠角色”，在全球范围内，是导致女性癌症死亡的第八大常见原因。2020 年，就有超过 31 万新发病例，约 20 万人因此失去生命，严重威胁着女性的生命健康。临床上，卵巢癌的发病十分隐匿，就像一个隐藏在暗处的 “杀手”，由于缺乏早期诊断标志物，很多患者发现时已经处于晚期，而且部分患者在治疗后还会产生化疗耐药，这使得卵巢癌患者的预后情况很差。即便目前的标准治疗方案是手术联合化疗，但患者的生存率依旧不容乐观。所以，寻找潜在的生物标志物，对于卵巢癌的早期筛查和改善患者预后至关重要，这就像是在黑暗中寻找那一丝曙光。
在探索卵巢癌奥秘的道路上，肿瘤微环境（TME）逐渐进入了科学家们的视野。肿瘤相关巨噬细胞（TAM）作为肿瘤微环境中数量众多的免疫细胞，贯穿肿瘤发展的各个阶段，它就像一个 “双面间谍”，有着复杂的生物学功能。一方面，它能诱导肿瘤进展、促进血管生成、帮助肿瘤转移，还会让肿瘤产生治疗耐药；另一方面，它的具体作用机制却还没有被完全搞清楚。已有研究发现，TAM 能分泌大量的表皮生长因子（EGF）激活周围肿瘤细胞的表皮生长因子受体（EGFR），从而促进卵巢癌细胞的生长、迁移、黏附和球体形成；它还能通过分泌转化生长因子 β 诱导蛋白（TGFBI）和腱生蛋白 C（TNC），帮助高级别浆细胞样卵巢癌细胞迁移。
而外泌体，作为细胞间通信的 “小信使”，在 TAM 发挥作用的过程中扮演着重要角色。TAM 可以通过分泌外泌体来调节癌症的发展，这些外泌体就像一个个装满 “秘密武器” 的小包裹，里面包含着蛋白质、非编码 RNA（ncRNA）等物质，从 TAM 传递到肿瘤细胞，影响肿瘤细胞的各种行为。比如，TAM 分泌的外泌体可以将 hsa_circ_0001610 转移到子宫内膜癌细胞中，降低其放射敏感性；TAM 来源的外泌体 miR - 95 能直接结合到 JunB 上，加速前列腺癌细胞的生长和侵袭。但是，TAM 来源的外泌体是如何影响卵巢癌进展的，这个问题还像一团迷雾，有待揭开。
微小 RNA（miRNA）是外泌体中最丰富的 ncRNA，它就像一把 “小钥匙”，能精准地开启或关闭细胞内的各种 “大门”，通过抑制靶 mRNA 来促进致癌信号传导。已有研究表明，外泌体中异常表达的 miRNA 会影响癌细胞与肿瘤微环境之间的相互作用。例如，在胃癌中，TAM 来源的外泌体 miR - 21 能使胃癌细胞对顺铂产生耐受性；在胰腺癌中，TAM 来源的外泌体通过转移 miR - 365，让胰腺癌细胞对吉西他滨产生耐药性。miR - 589 - 3p 是一种多功能的 miRNA，在多种肿瘤的增殖、转移等过程中都有它的身影，但它是否参与卵巢癌的进展，还是一个未知数。
为了揭开这些谜团，作者[第一作者单位] 的研究人员在《Journal of Ovarian Research》期刊上发表了题为 “Tumor - associated macrophage - derived exosomal miR - 589 - 3p promotes ovarian cancer progression through targeting BCL2L13” 的论文。研究发现，TAM 来源的外泌体 miR - 589 - 3p 通过抑制 BCL2L13 的表达，促进了卵巢癌的进展。这一发现为卵巢癌的治疗提供了新的潜在靶点，就像为治疗卵巢癌找到了一把新的 “钥匙”，具有重要的意义。
研究人员在这项研究中，用到了几个关键的技术方法。首先是细胞培养技术，他们培养了卵巢癌细胞（SKOV3、CAOV3）和人外周血单个核细胞（PBMC），并将 PBMC 诱导分化为 M2 型巨噬细胞，构建了体外研究模型。接着使用超速离心法从 M2 型巨噬细胞中分离外泌体。然后运用定量逆转录聚合酶链反应（qRT - PCR）来检测相关基因的表达水平；利用生物信息学软件 TargetScan 和 miRDB 预测 miR - 589 - 3p 的靶基因，并通过双荧光素酶报告基因实验和 RNA 结合蛋白免疫沉淀（RIP）实验来验证 miR - 589 - 3p 与靶基因的相互作用；最后通过细胞计数试剂盒 - 8（CCK - 8）实验和流式细胞术实验，探究卵巢癌细胞增殖和凋亡能力的变化。
下面我们来看看具体的研究结果。
1. TAM 来源外泌体的提取和鉴定
研究人员为了探究外泌体在卵巢癌中的作用，首先用白细胞介素 - 4（IL - 4）和白细胞介素 - 13（IL - 13）处理 PBMC，使其在体外分化为 M2 型巨噬细胞，然后利用超速离心法从 M2 型巨噬细胞中分离外泌体。通过透射电子显微镜（TEM）观察发现，提取的外泌体呈现出具有双层膜的囊泡结构；纳米颗粒跟踪分析（NTA）显示，这些双层膜囊泡的直径在 100 - 200nm 之间；蛋白质免疫印迹（WB）实验结果表明，外泌体标记蛋白（CD63、CD81、TSG101 和 HSC70）在外泌体中的表达显著增强。这些实验结果就像一个个 “小印章”，证明了研究人员成功提取到了 M2 型巨噬细胞来源的外泌体。
2. TAM 来源外泌体促进卵巢癌细胞增殖并抑制其凋亡
为了研究 TAM 来源外泌体对卵巢癌细胞的生物学功能影响，研究人员将 TAM 分泌的外泌体与 SKOV3 和 CAOV3 细胞共培养。CCK - 8 实验结果显示，共培养后 SKOV3 和 CAOV3 细胞的增殖能力显著提高。当用外泌体抑制剂 GW 处理 M2 型巨噬细胞，抑制外泌体释放后，这种促进增殖的作用明显减弱。接着，流式细胞术实验表明，TAM 来源外泌体能够显著降低 SKOV3 和 CAOV3 细胞的凋亡率，而加入 GW 后，这种抑制凋亡的作用被逆转。此外，研究人员用凋亡诱导剂羰基氰化物 3 - 氯苯基腙（CCCP）进行剂量依赖性凋亡实验，发现 CCCP 处理后细胞凋亡能力呈剂量依赖性增加，而外泌体与 CCCP 共同处理组的细胞凋亡能力明显低于单独使用 CCCP 处理组，这进一步说明了外泌体具有一定的抗凋亡作用。综合这些实验结果，可以得出 M2 型巨噬细胞来源的外泌体能够增强卵巢癌细胞的增殖能力，抑制其凋亡。
3. TAM 来源外泌体 miR - 589 - 3p 促进卵巢癌细胞增殖并抑制其凋亡
由于 miRNA 常常参与细胞间的通信，研究人员通过 qRT - PCR 检测发现，与 SKOV3 和 CAOV3 细胞共培养后，TAM 来源外泌体中的 miR - 589 - 3p 表达显著升高。为了确定外泌体是否通过 miR - 589 - 3p 促进卵巢癌进展，研究人员在 TAM 中转染 miR - 589 - 3p 抑制剂或阴性对照（NC）抑制剂。qRT - PCR 结果显示，转染 miR - 589 - 3p 抑制剂后，M2 型巨噬细胞分泌的外泌体中 miR - 589 - 3p 水平受到抑制，用这些外泌体处理 SKOV3 和 CAOV3 细胞后，细胞内 miR - 589 - 3p 水平也显著下降。后续的 CCK - 8 实验和流式细胞术实验表明，转染 miR - 589 - 3p 抑制剂的 TAM 来源外泌体，逆转了外泌体对细胞增殖的促进作用和对细胞凋亡的抑制作用。这一系列实验表明，TAM 来源外泌体 miR - 589 - 3p 对卵巢癌细胞的恶性进展起到了推动作用。
4. BCL2L13 是 miR - 589 - 3p 的下游靶基因
为了探究 miR - 589 - 3p 影响卵巢癌进展的机制，研究人员通过 miRDB 和 Targetscan 搜索 miR - 589 - 3p 的靶基因，并筛选出凋亡相关基因取交集，发现有五个凋亡相关基因。qRT - PCR 检测结果显示，在敲低 miR - 589 - 3p 后，SKOV3 和 CAOV3 细胞中 BCL2L13 的表达升高最为明显，因此研究人员猜测 BCL2L13 是 miR - 589 - 3p 的靶基因。Targetscan 网站预测结果显示，miR - 589 - 3p 与 BCL2L13 的 3’非翻译区（3’UTR）区域存在结合位点。双荧光素酶报告基因实验和 RIP 实验进一步验证了 miR - 589 - 3p 与 BCL2L13 之间的结合关系。此外，qRT - PCR 和 WB 实验结果表明，TAM 来源外泌体与 SKOV3 和 CAOV3 细胞共培养后，BCL2L13 的表达水平明显降低。这些结果都证明了 BCL2L13 是 miR - 589 - 3p 的下游靶基因。
5. BCL2L13 沉默逆转 miR - 589 - 3p 敲低对细胞进展的影响
研究人员在 SKOV3 和 CAOV3 细胞中敲低 BCL2L13，通过 qRT - PCR 和 WB 检测发现，敲低 BCL2L13 后其表达显著降低，说明转染成功。CCK - 8 实验结果显示，BCL2L13 沉默逆转了 miR - 589 - 3p 敲低对细胞生长的抑制作用。流式细胞术实验结果表明，转染 miR - 589 - 3p 抑制剂后细胞凋亡率增加，而共转染 miR - 589 - 3p 抑制剂和 si - BCL2L13 后，这种现象得到了挽救。此外，抑制剂与 CCCP 共同处理组的细胞凋亡能力明显高于单独使用 CCCP 处理组。这些结果表明，BCL2L13 敲低消除了 miR - 589 - 3p 沉默对细胞进展的影响。
综合研究结果和讨论部分，这项研究揭示了 TAM 来源外泌体在卵巢癌发展中起着关键作用。TAM 来源外泌体中的 miR - 589 - 3p 通过靶向 BCL2L13，促进了卵巢癌细胞的增殖，抑制了细胞凋亡，从而加速了卵巢癌的进展。这一研究成果为我们理解卵巢癌细胞与 TAM 之间的关系提供了新的视角，也让我们看到了外泌体 miR - 589 - 3p 作为卵巢癌治疗新靶点的潜力。它就像一盏明灯，为卵巢癌的治疗研究照亮了新的方向，有望为卵巢癌患者带来新的希望和治疗策略，让我们在对抗卵巢癌这个 “敌人” 的道路上又前进了一步。
