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为明确 RET 致病性变异的功能影响及致病机制，研究人员以携带 RET 变异的细胞系为对象开展研究。结果发现部分变异影响细胞增殖和迁移，且表型有差异。该研究强调功能检测的重要性，值得科研读者一读。
先天性巨结肠症（HSCR）具有广泛的遗传异质性，72% 的病例涉及 10 个基因的致病性变异，这些基因构成了对肠神经系统（ENS）发育至关重要的基因调控网络（GRN）。受体酪氨酸激酶基因RET是最为关键的致病基因，根据不同表型，12%-50% 的患者携带有该基因的变异。RET在 ENS 前体的增殖和迁移过程中发挥着关键作用，这些过程出现缺陷会导致 HSCR。然而，RET致病性变异的功能影响及其致病机制仍未完全明晰。
为解决这一问题，第一作者单位的研究人员对一种依赖RET的神经嵴来源细胞系进行了研究，该细胞系携带 5 种错义（c.166C>A [p.Leu56Met]；c.532G>C [p.Glu178Gln]；c.2372A>T [p.Tyr791Phe]；c.2765C>A [p.Ser922Tyr]；或 c.2994T>A [p.Phe998Leu]）或 3 种无义（c.612C>A、c.2308C>T 或 c.2943C>G）杂合致病性RET变异中的一种。研究人员利用基于互补 DNA（cDNA）和 CRISPR 的引导反向插入机制工程（PRIME）编辑技术，结合定量增殖和迁移实验，观察到 3 种错义变异（c.612C>A [p.Tyr204?]；c.2308C>T [p.Arg770?]；和 c.2943C>G [p.Tyr981?]）和所有无义变异均导致细胞增殖和迁移能力显著下降。值得注意的是，致病性存在争议的错义变异 c.2372A>T（p.Tyr791Phe）似乎表现为良性。重要的是，迁移能力下降的严重程度与增殖缺陷并不总是相关，而且无义变异的表型严重程度与其在 RET 蛋白中的位置无关。
该研究强调，准确评估 HSCR 相关变异的致病性需要进行针对性的功能检测，而不能仅仅依赖生物信息学预测，生物信息学预测可通过纳入功能数据加以完善。
