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为探究疟疾防控新途径，泰国玛希隆大学（Faculty of Allied Health Sciences, Thammasat University）研究人员对间日疟原虫 Pvs48/45 和 Pvs47 基因多态性展开研究，发现其多态性有限，该成果有助于疟疾流行地区开发有效疫苗。
疟疾，这一古老而又顽固的传染病，如同隐匿在热带和亚热带地区的 “健康杀手”，时刻威胁着人类的生命健康。它由疟原虫属寄生虫引发，借助受感染的雌性按蚊叮咬传播给人类。在 2022 年，全球 85 个疟疾流行国家中，就有 2.49 亿疟疾病例，着实令人揪心。在众多疟原虫种类里，间日疟原虫（Plasmodium vivax）在亚太地区、中南美洲 “兴风作浪”，成为当地疟疾的主要 “元凶”。在泰国，它更是导致了超过 93% 的疟疾病例 。
尽管过去十年间全球疟疾发病率有所下降，间日疟原虫对现有抗疟治疗也还算敏感，但耐药间日疟原虫的出现以及预防疫苗的缺失，使得疟疾防控工作困难重重。研发疟疾疫苗迫在眉睫，而传播阻断疫苗（TBVs）作为疟疾防控和消除的关键 “武器”，致力于针对疟原虫的有性阶段，减少或阻断寄生虫传播。其中，Pvs48/45 和 Pvs47 作为潜在的 TBVs 靶点，受到了研究人员的重点关注。然而，疟原虫基因的遗传多样性在全球不同地区存在差异，这给疫苗研发带来了极大挑战。为了深入了解这一情况，泰国玛希隆大学（Faculty of Allied Health Sciences, Thammasat University）的 Jiraporn Kuesap 等人开展了一项针对泰国流行地区间日疟原虫临床分离株中 Pvs48/45 和 Pvs47 基因遗传多样性的研究，该研究成果为疟疾防控和疫苗研发提供了重要依据。
在这项研究中，研究人员采用了多种关键技术方法。首先，从 2006 年至 2019 年，他们精心收集了泰国两个地区（泰国 - 缅甸边境的达府 45 例、北碧府 10 例，泰国 - 马来西亚边境的拉廊府 20 例、也拉府 25 例）共 100 例间日疟原虫样本，这些样本均来自疟疾患者。样本收集后，利用 QIAamp DNA 提取试剂盒，按照标准流程从 EDTA 血液样本中提取疟原虫基因组 DNA。接着，运用聚合酶链反应（PCR）技术，对 Pvs48/45 和 Pvs47 基因进行特异性扩增。扩增产物经过 QIAquick PCR 纯化试剂盒纯化后，借助 ABI 3730XL DNA 分析仪进行双向测序，确保序列准确性。最后，通过 MEGA X 和 DnaSP 6.0 等专业软件，对核苷酸和推导的氨基酸序列进行比对、分析，从而探究基因的遗传多样性、中性进化以及单倍型等特征。
研究结果令人眼前一亮。在 Pvs48/45 基因方面，36 个样本成功扩增，产物大小为 1605bp。与 Sal - I 株序列相比，发现了 17 个单核苷酸多态性（SNPs），其中 3 个位点（631A、750C 和 1253G）发生了 100% 突变。在推导的氨基酸序列中，有 15 个非同义替换和 2 个同义替换，共确定了 11 种单倍型。H2 单倍型最为常见，频率达 55.6%。在 Pvs47 基因方面，62 个样本成功扩增，产物大小为 1507bp。它比 Pvs48/45 基因表现出更高的多态性，有 24 个 SNPs，4 个位点（22A、24C、26A 和 27G）突变率为 100% 。氨基酸序列中有 18 个非同义替换和 5 个同义替换，确定了 26 种单倍型，H1 单倍型最为常见，频率为 16.1% 。
从遗传多样性和自然选择分析来看，Pvs48/45 的平均核苷酸差异数（K = 1.40317）比 Pvs47（K = 3.67319）低 2.6 倍 。Pvs48/45 和 Pvs47 的单倍型多样性（Hd）分别为 0.67930 和 0.94183，核苷酸多样性（π）分别为 0.00104 和 0.00321。Tajima’s D 值显示，Pvs48/45 和 Pvs47 均为负值，且 Pvs48/45 差异显著（P < 0.05），表明存在纯化选择。此外，Pvs47 的重组参数较高，意味着其减数分裂重组产生的基因多样性更丰富。
通过构建全球 Pvs48/45 和 Pvs47 序列的单倍型网络，研究人员发现全球范围内这些基因存在地理分化。Pvs48/45 在 8 个国家的 344 个序列中确定了 37 种单倍型，Pvs47 在 138 个序列中确定了 45 种单倍型。泰国序列中，两种基因的单倍型频率较高，反映出泰国人群的遗传多样性较高。同时，不同地区间 Pvs48/45 和 Pvs47 的 FST值较高，进一步证实了种群间的高多样性。
综合研究结论和讨论部分，此次研究揭示了泰国间日疟原虫分离株中 Pvs48/45 和 Pvs47 的遗传多样性和氨基酸替换情况。研究结果与先前研究一致，表明间日疟原虫 TBV 候选抗原的序列多态性有限。不过，不同地区的间日疟原虫分离株遗传多样性存在差异，这可能与抗疟药耐药性、传播强度、重组率、遗传漂变和自然选择等因素有关。这些遗传数据为疟疾防控提供了宝贵信息，不仅有助于开发有效的抗疟疾 TBVs，还能作为遗传标记，描述不同流行地区疟原虫的多样性，为全球疟疾防控事业注入了新的希望。
