miR-365-3p/CPT1A 轴：肺癌治疗的潜在新靶点

为探究肺癌发病机制，研究人员研究 miR-365-3p/CPT1A 轴，发现其影响癌细胞增殖迁移，或成治疗靶点。

　　肺癌，这一全球范围内高发且致命的恶性肿瘤，长期以来严重威胁着人类健康。尽管在过去十年间，肺癌的治疗手段取得了一定进展，但肺癌生长和进展的潜在机制依旧迷雾重重。肿瘤细胞的一个显著特征便是不受控制的增殖，而这一过程与能量代谢密切相关。除了广为人知的有氧糖酵解（Warburg 效应），脂肪酸代谢的失调也是肿瘤代谢重编程的关键环节。脂肪酸氧化（FAO）在脂肪酸代谢中占据重要地位，它能为肿瘤细胞的增殖提供大量能量，进而推动肿瘤的发展。肉碱棕榈酰转移酶 1A（CPT1A）作为 FAO 过程中的限速酶，其在多种癌症的进展中都扮演着重要角色，然而，CPT1A 在肺癌中的具体作用以及微小 RNA（miRNA）对 CPT1A 介导的 FAO 的调控机制却尚不明确。

在此背景下，来自北华大学附属医院和长春肿瘤医院的研究人员展开了深入研究，相关成果发表于《Scientific Reports》。他们致力于探索 miR-365-3^p/CPT1A 轴在肺癌中的功能及作用机制，期望为肺癌的治疗开辟新的方向。

研究人员在本次研究中运用了多种关键技术方法。他们收集了长春肿瘤医院 83 对肺癌组织和癌旁正常组织样本。通过脂质体转染技术，将 miR-365-3^p模拟物等转染到细胞中；利用蛋白质免疫印迹（Western blot）和定量实时 PCR（qRT-PCR）技术，分别从蛋白质和 mRNA 水平检测相关分子的表达；借助双荧光素酶报告基因检测，验证 miR-365-3^p与 CPT1A 的靶向关系；采用油红 O 染色、免疫荧光染色等技术，对细胞内脂质代谢等情况进行观察分析；还构建了裸鼠皮下注射模型，开展体内实验研究。

研究结果如下：

1. miR-365-3^p靶向抑制 CPT1A 表达：研究人员借助生物信息学工具预测出可能靶向 CPT1A 的多个 miRNA，经 Western blot 分析发现，miR-365-3^p能显著降低 CPT1A 的表达水平。qRT-PCR 检测进一步证实，miR-365-3^p模拟物转染后，CPT1A 的 mRNA 表达明显下降。双荧光素酶报告基因检测结果表明，miR-365-3^p直接作用于 CPT1A 的 3’非翻译区（3’-UTR），进而抑制其表达。
2. miR-365-3^p通过 CPT1A 抑制 FAO：免疫荧光染色和油红 O 染色结果显示，miR-365-3^p模拟物和敲低 CPT1A 均会使肺癌细胞内脂滴数量显著增加，而敲低 CPT1A 会抵消 miR-365-3^p对脂滴含量的调节作用。FAO 分析表明，miR-365-3^p模拟物或敲低 CPT1A 会降低 FAO 速率，且在 miR-365-3^p转染的细胞中敲低 CPT1A，会消除 miR-365-3^p对 FAO 的抑制功能。ATP 生成实验也表明，miR-365-3^p模拟物或敲低 CPT1A 会使肺癌细胞内 ATP 生成量明显减少。这一系列实验结果表明，miR-365-3^p主要通过抑制 CPT1A 的表达，来抑制 FAO 过程，进而影响肺癌细胞的代谢。
3. miR-365-3^p/CPT1A 轴调控肺癌细胞增殖和迁移：细胞增殖实验和伤口愈合实验表明，miR-365-3^p模拟物和敲低 CPT1A 均能显著降低 A549 和 H1299 肺癌细胞的增殖速率和迁移能力，且在 miR-365-3^p转染的细胞中敲低 CPT1A，会极大削弱 miR-365-3^p对细胞增殖和迁移的调节作用。体内裸鼠实验结果与体外实验一致，过表达 miR-365-3^p或敲低 CPT1A 能有效抑制肿瘤生长，而敲低 CPT1A 会使 miR-365-3^p抑制肿瘤生长的能力几乎丧失。此外，用 CPT1 抑制剂依托莫司（Etomoxir）处理细胞后，miR-365-3^p对细胞增殖和迁移的抑制作用被抵消，这表明 miR-365-3^p/CPT1A 轴对细胞增殖和迁移的调控作用是通过 FAO 途径实现的。
4. miR-365-3^p与 CPT1A 表达的临床相关性：研究人员对 83 对肺癌组织和癌旁正常组织进行免疫组化分析后发现，肺癌组织中 miR-365-3^p的表达明显低于癌旁正常组织，而 CPT1A 的表达则显著高于癌旁正常组织。生存分析显示，miR-365-3^p表达较高的患者总体生存期（OS）往往更长，而 CPT1A 表达较高的患者 OS 率则较低。相关性分析表明，在肺癌患者样本中，miR-365-3^p与 CPT1A 的表达呈负相关。

综合研究结果与讨论，该研究首次揭示了 miR-365-3^p/CPT1A 轴在肺癌中的生物学功能。miR-365-3^p通过靶向 CPT1A，抑制其表达，进而调控 CPT1A 介导的 FAO 过程，最终抑制肺癌细胞的增殖和迁移。在肺癌患者中，miR-365-3^p与 CPT1A 的表达呈负相关，且二者的表达水平分别预示着较好和较差的临床预后。这一研究成果为深入理解肺癌的发病机制提供了新的视角，也为肺癌的治疗提供了一个极具潜力的治疗靶点，有望推动肺癌治疗领域的进一步发展，为肺癌患者带来新的希望。