嵌合自身抗体受体 T 细胞疗法新突破：为重症肌无力精准治疗点亮希望

为治疗乙酰胆碱受体阳性重症肌无力（AChR-MG），研究人员开发 AChR-CAART，发现 CD28 跨膜结构域可提升其稳定性和功能。

　　

重症肌无力治疗困境催生新探索

重症肌无力（Myasthenia Gravis，MG）是一种令人棘手的自身免疫疾病，患者的身体仿佛陷入了一场混乱的 “内战”。在正常情况下，神经和肌肉之间通过乙酰胆碱受体（Acetylcholine Receptor，AChR）进行顺畅的信号传递，肌肉得以自如地收缩和舒张。但在 MG 患者体内，自身抗体却像一群失控的 “叛军”，它们疯狂地攻击 AChR，使得神经肌肉传递严重受阻，肌肉逐渐变得软弱无力，患者连最基本的睁眼、吞咽、呼吸等动作都变得异常艰难，生活质量急剧下降，生命安全也时刻受到威胁。

目前，MG 的治疗手段主要是广泛抑制免疫功能，但这就像是一场 “杀敌一千，自损八百” 的战斗，在抑制异常免疫反应的同时，患者的免疫系统也变得脆弱不堪，极易受到各种病原体的侵袭，感染风险大幅增加，让患者陷入了两难的困境。因此，寻找一种更加精准、有效的治疗方法成为了医学领域亟待解决的难题。

在这样的背景下，来自国外研究机构的研究人员勇挑重担，开展了一项旨在开发针对 AChR-MG 的嵌合自身抗体受体 T 细胞（Chimeric Autoantibody Receptor T cells，CAART）疗法的研究。他们的研究成果发表在《SCIENCE ADVANCES》上，为 AChR-MG 的治疗带来了新的曙光。

研究方法：多技术协同探索治疗新路径

研究人员采用了多种关键技术来开展这项研究。首先，他们通过基因工程技术设计并构建了携带不同跨膜结构域的 AChR-CAAR 质粒，为后续实验奠定基础。接着，利用慢病毒转导技术将构建好的质粒导入人原代 T 细胞，使其成为具有靶向杀伤能力的 AChR-CAART 细胞。然后，运用体外细胞共培养实验和基于荧光素酶的细胞毒性检测实验，评估 AChR-CAART 细胞对靶细胞的杀伤活性。此外，通过构建 Nalm-6 细胞异种移植小鼠模型，在体内进一步验证 AChR-CAART 细胞的治疗效果。

研究结果：关键发现为治疗指明方向

1. A210.TMD8α-CAAR 保留主要免疫原区域构象：为精准清除与 AChR-MG 相关的自身反应性 B 细胞，研究人员将 AChRα 亚基的 EC1 结构域（αEC1_1–210或 A210）融入 CAAR 的胞外区域，构建出 A210.TMD8α-CAAR。通过与多种单克隆抗体结合实验表明，A210.TMD8α-CAAR 中主要免疫原区域（Main Immunogenic Region，MIR）的构象与天然状态高度相似，这意味着它能够精准识别并结合靶细胞表面的自身抗体，为后续的杀伤作用提供了关键前提。
2. A210.TMD8α-CAAR 表面表达降低但功能仍存：在体外扩增过程中，研究人员意外发现 A210.TMD8α-CAAR 在细胞表面的表达逐渐减少。进一步研究发现，虽然总 CAAR 表达量不变甚至有所增加，但大量 CAAR 被滞留于细胞内。不过，功能检测实验显示，即便表面表达下降，A210.TMD8α-CAART 细胞与表达抗 MIR B 细胞受体（B Cell Receptor，BCR）的 Nalm-6 细胞共培养时，仍能特异性杀伤靶细胞，这表明其表面残留的 CAAR 仍具备功能活性。
3. 跨膜结构域（TMD）修饰增强 AChR-CAAR 表面稳定性：研究人员尝试对 TMD 进行修饰以改善 AChR-CAAR 的表面表达稳定性。实验结果显示，将 CD8α TMD 替换为 CD28 TMD 后构建的 A210.TMD28-CAAR，在体外 T 细胞扩增过程中能够持续稳定地表达于细胞表面。而对 CD8α TMD 中的半胱氨酸残基进行突变，虽可提高 A210.TMD8α-CAAR 向细胞膜的转运效率，但对其表面表达稳定性并无影响；对 CD28 TMD 二聚化基序进行突变，同样不影响 A210.TMD28-CAAR 的表面表达稳定性，这表明 CD28 TMD 维持 CAAR 表达的机制并非依赖二聚化。
4. 抑制溶酶体降解部分恢复 A210.TMD8α-CAAR 表面表达：鉴于 CAR 分子可经泛素化后被溶酶体降解，研究人员对 A210.TMD8α-CAAR 进行了相关突变实验。结果发现，突变 CD137 和 CD3ζ 信号域的赖氨酸残基为精氨酸后，A210.TMD8α-CAAR 的表面表达并未得到恢复。然而，使用内质网应激抑制剂 Kira6、溶酶体功能抑制剂氯化铵（NH₄Cl）以及同时抑制 IRE1α 激酶和溶酶体蛋白降解的舒尼替尼处理后，A210.TMD8α-CAAR 的表面表达均有不同程度的提升，这表明溶酶体降解在抑制 A210.TMD8α-CAAR 表面表达中起重要作用。
5. A210.TMD28-CAART 与 A210.TMD8α-CAART 细胞毒性相当：由于 A210.TMD8α-CAART 和 A210.TMD28-CAART 表面 CAAR 表达水平不同，研究人员通过分选和稀释调整两组细胞中 CAAR 阳性细胞比例，使其具有可比性。对比实验结果显示，在 24 小时内，二者对高亲和力（克隆 637）和低亲和力（克隆 192）抗 MIR Nalm-6 细胞的细胞毒性相当，只是 A210.TMD28-CAART 杀伤靶细胞的动力学较 A210.TMD8α-CAART 稍慢，且二者产生干扰素 -γ（Interferon-γ，IFN-γ）的水平也相近，同时对非靶细胞均无细胞毒性和 IFN-γ 产生。
6. A210.TMD28-CAART 有效控制小鼠异种移植模型中靶细胞生长：在小鼠异种移植模型实验中，研究人员给小鼠注射 Nalm-6 细胞后，分别用 A210.TMD8α-CAART 和 A210.TMD28-CAART 进行治疗。结果发现，在治疗后的急性期（第 4 - 8 天），两种疗法都能有效控制靶细胞生长。但在第 8 - 13 天，A210.TMD8α-CAART 治疗组的 Nalm-6 细胞出现反弹，而 A210.TMD28-CAART 治疗组则未出现此现象。进一步分析发现，A210.TMD28-CAART 治疗组小鼠脾脏中 Nalm-6 细胞频率更低，且 A210.TMD28-CAART 在体内能维持更高的表面与总 AChR-CAAR 表达比例，这表明 CD28 TMD 可增强 AChR-CAAR 在体内的细胞内转运和表面表达稳定性，进而提升治疗效果。

研究意义：开辟重症肌无力治疗新方向

这项研究意义重大。一方面，研究人员成功开发出 AChR-CAART，为 AChR-MG 的治疗提供了一种全新的潜在策略，有望打破传统治疗的局限，实现精准靶向治疗，减少对患者免疫系统的过度抑制，降低感染风险。另一方面，研究发现 CD28 TMD 在维持 CAAR 稳定性和体内功能方面起着关键作用，这为后续优化 CAAR 设计提供了重要理论依据，有助于开发出更高效、更稳定的细胞免疫疗法。然而，目前该研究仍处于临床前阶段，后续还需进一步开展全面的药理学研究和深入评估潜在的脱靶毒性。但无论如何，这项研究为未来 AChR-MG 的精准细胞免疫治疗奠定了坚实基础，照亮了 AChR-MG 治疗领域前行的道路，让众多患者看到了康复的希望。