泰国革蜱对氯菊酯耐药性研究成果显著，为蜱虫防控提供关键依据

为监测革蜱（Rhipicephalus linnaei）种群耐药性，研究人员调查其对氯菊酯耐药性，发现突变与耐药相关，对蜱虫防控意义重大。

　　

在自然界中，蜱虫就像一个个隐藏的 “小恶魔”，悄无声息地威胁着动物和人类的健康。它们不仅是众多病原体的传播媒介，还逐渐对常用杀虫剂产生了耐药性，这一现象给全球的媒介控制工作带来了巨大挑战。革蜱（Rhipicephalus linnaei）作为一种广泛分布的蜱虫，能够传播多种对人类和动物健康有重要影响的病原体，其耐药性问题不容忽视。然而，此前关于泰国革蜱对氯菊酯（Permethrin）的耐药性研究十分有限，这就如同在黑暗中摸索，给蜱虫防控工作带来诸多困难。为了打破这一困境，来自 Walter Reed Army Institute of Research-Armed Forces Research Institute of Medical Sciences 的研究人员开展了一项全面的调查研究，相关成果发表在《Scientific Reports》上。

研究人员为了深入探究革蜱对氯菊酯的耐药情况，运用了多种关键技术方法。在样本采集方面，从泰国各地的家养犬身上收集了饱血雌蜱，在实验室中孵化出幼虫用于后续实验；同时，以美国俄克拉荷马州立大学的血红扇头蜱（Rhipicephalus sanguineus s.l.）作为对比种群。实验方法上，采用食品和农业组织的幼虫包测试（LPT）评估蜱虫种群的表型耐药性；通过聚合酶链反应 - 限制性片段长度多态性（PCR - RFLP）分析和 DNA 测序对蜱虫进行基因分型，确定耐药相关的基因突变；利用 Probit 分析等统计方法分析数据，探究基因型与表型之间的关联。

研究结果如下：

• 表型评估：通过 LPT 对来自泰国 14 个省份以及曼谷和春武里省部分地区的革蜱幼虫进行检测，以喃邦省的幼虫为基线对比，发现泰国革蜱幼虫对氯菊酯已产生不同程度的耐药性，耐药比（RR）范围为 1.00 - 56.00，其中曼谷 Phasichareon 地区的幼虫耐药性最强（RR = 56.00）。不同地区革蜱幼虫的半数致死浓度（LC₅₀）也存在差异，泰国种群的 LC₅₀范围为 0.21% - 12.00%（w/v），而血红扇头蜱对照种群的 LC₅₀为 0.02%（w/v）。此外，通过概率单位分析（Probit analysis）和热图展示了不同种群的耐药情况，并且利用似然比检验（LRT）发现多数种群的死亡率 - 剂量回归存在显著差异，但部分种群间具有相似的耐药水平123。

• 基因型评估：对电压门控钠离子通道（vgsc）基因的结构域 II 和 III 进行 DNA 序列比对，发现了多个突变位点，包括在结构域 II 的 170、190、215 位置和结构域 III 的 2134、2166 位置。其中一些突变此前已在其他蜱虫中报道，而本研究还发现了新的纯合抗性基因型（如 c.190AG）和同义突变（c.2166T > C）。开发的 PCR - RFLP 检测方法能够有效检测特定的单核苷酸多态性（SNP），经与 DNA 测序结果对比验证，该方法在检测结构域 II 的突变时准确率达 95.83%，检测结构域 III 的突变时准确率为 100%456。

• 耐药等位基因频率：分析不同耐药水平种群的耐药等位基因频率（RAF）发现，c.190C > A 和 c.2134T > C 的 RAF 值随耐药水平增加而上升，c.215G > T 的 RAF 值则无明显规律。在高耐药种群中，检测到 190 或 2134 位点的单突变，并且发现新等位基因 c.190CG 和 c.190AG。此外，通过分析发现 c.190C > A/c.190C > G 突变在耐氯菊酯的革蜱种群中比 c.2134T > C 更普遍789。

• 表型与基因型的相关性：相关性分析表明，c.190C > A 和 c.2134T > C 突变与蜱虫的耐药表型显著相关，随着耐药等位基因频率增加，种群的耐药水平也相应提高，但 c.215G > T 突变与耐药表型无明显关联10。

• 单倍型鉴定和统计分析：研究共鉴定出 18 种单倍型，其中多数为包含杂合基因型的单倍型，只有一种野生型或敏感基因型 Hap002。通过基因 HapR 软件分析发现，H001 单倍型主要为敏感基因型，H002 和 H003 单倍型的蜱虫对氯菊酯的耐药性较强。连锁不平衡分析显示，190 和 215 位点的 SNP 紧密连锁1112。

• 分子鉴定：对来自不同地区的革蜱幼虫进行线粒体基因（COXI、12S rDNA 和 16S rDNA）分析，结果显示泰国革蜱样本间序列相似度极高，均属于热带谱系分支，并且与老挝、斐济和澳大利亚的革蜱序列相似。同时，研究还发现美国实验室种群与泰国种群存在明显分化13。

研究结论和讨论部分指出，该研究首次全面调查了泰国革蜱对氯菊酯的耐药性，发现了与耐药表型相关的基因突变，这些突变可能是泰国革蜱对氯菊酯耐药的重要机制，但也可能存在其他耐药机制，需进一步研究。此外，研究开发的 PCR - RFLP 检测方法可用于泰国及东南亚其他地区革蜱种群的监测，有助于评估氯菊酯耐药性状况和靶点耐药的影响。未来研究可扩大样本范围，涵盖更多东南亚和太平洋地区的种群，包括温带谱系，并研究不同的氯菊酯暴露模式，为蜱虫防控提供更全面的依据。这项研究成果为蜱虫防控策略的制定提供了关键依据，有助于减少蜱传疾病的传播风险，保护动物和人类的健康。