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为解决水牛精液冷冻后质量下降问题，研究人员探究橄榄果提取物（OFE）对其影响，发现低剂量 OFE 可改善精液质量。
橄榄果提取物对水牛精液冷冻保存的影响：精液质量提升的新希望
在全球畜牧业中，水牛凭借其作为动物蛋白生产者的重要经济价值，尤其是在热带国家，其种群数量近年来稳步增长。随着现代养殖技术的发展，水牛养殖的盈利能力愈发依赖于遗传改良，而先进的生殖技术成为实现这一目标的关键，精液冷冻保存技术则是其中的重要一环。它能够实现精子的长期储存和运输，为人工授精和体外胚胎生产计划提供有力支持。
然而，冷冻保存过程就像一场对精子的 “残酷考验”。在这个过程中，精子会遭遇冷休克和渗透压冲击，冰晶的形成和氧化应激（OS）会对精子细胞造成物理损伤。水牛精子因其细胞膜独特的脂质组成，如较低的胆固醇与磷脂比例以及高浓度的长链多不饱和脂肪酸，对冷冻诱导的氧化应激格外敏感。这使得冷冻后的精子活力和存活率下降，顶体完整性受损，严重影响了精液的质量和受精能力，进而制约了水牛繁殖效率的提升。
为了攻克这一难题，来自国外研究机构的研究人员开展了一项旨在探究橄榄果提取物（OFE）对水牛精液冷冻保存效果影响的研究。该研究成果发表在《Animal Reproduction Science》杂志上，为水牛繁殖领域带来了新的希望。
在这项研究中，研究人员运用了多种关键技术方法。首先，他们采用了一种新的专利方法从橄榄中提取 OFE，并通过高压液相色谱对其多酚化合物进行定性和定量分析。在精液处理方面，研究人员从 16 头 5±1.4 岁的穆拉水牛公牛（Murrah buffalo bulls）采集精液，每头公牛采集两次射精样本。每次射精样本被均分为四份，分别在含有不同浓度 OFE（0、72、143 和 214μL/L，对应 0、50、100 和 150μM 羟基酪醇（HT） ）的冷冻稀释液中进行稀释。随后，对精液进行冷冻保存和复苏操作，并运用计算机辅助精子分析（CASA）技术评估精子活力和动力学参数，通过台盼蓝 / 吉姆萨染色（Trypan Blue/Giemsa staining）检测精子活力和顶体完整性，利用低渗肿胀试验（HOS test）评估精子膜功能，同时采用特定试剂盒和分光光度法测定精液中的活性氧代谢产物（ROMs）水平和生物抗氧化潜力（BAP）。
研究结果令人振奋，研究人员发现，在精液采集时，具有功能性膜（HOS+）的精子百分比、总活精子百分比和顶体完整活精子（AIL）百分比分别为 61.8±3.1、61.0±2.5 和 59.0±2.6，渐进运动性为 60.3±1.9。但无论何种处理，冷冻解冻都会显著降低（P<0.01）HOS + 精子、总活精子、AIL 精子的百分比以及渐进运动性。
在添加 OFE 对解冻后精子质量的影响方面，添加 D50（50μM HT）和 D100（100μM HT） OFE 的稀释液相较于对照组和 D150（150μM HT） OFE，显著提高了解冻后的总运动性和渐进运动性，且 D50 组的效果优于 D100 组。在精子动力学参数上，D50 组的曲线速度（VCL）、平均路径速度（VAP）和直线速度（VSL）均显著高于其他组。在精子活力和完整性方面，D50 OFE 处理的精液总活精子、具有功能性膜（HOS+）的精子和完整顶体精子的比例显著高于对照组，D100 OFE 处理也有类似效果，但 D150 OFE 处理则降低了这些指标。
在氧化应激标记物方面的研究中，研究人员发现，添加 D50 OFE 的稀释液显著增加了解冻后精液的生物抗氧化潜力（BAP），同时降低了活性氧代谢产物（ROMs）水平。这表明 OFE 能够有效对抗冷冻保存过程中产生的过量 ROS，减少氧化应激对精子的损伤。
研究结论与讨论部分进一步揭示了该研究的重要意义。研究证实了在冷冻稀释液中添加 OFE 可通过降低冷冻诱导的氧化应激，提高解冻后水牛精液质量的假设。低剂量的 OFE（D50）能够有效改善精子的运动性、动力学参数、活力、膜功能和顶体完整性，而高浓度（D150）则会产生负面影响，呈现出明显的剂量依赖性效应。这一发现为优化水牛精液冷冻保存技术提供了新的策略，即通过添加合适浓度的 OFE 来提高精子的冷冻耐受性，从而提升水牛的繁殖效率。此外，OFE 来源广泛，可从橄榄加工废料中提取，不仅成本效益高，还符合循环经济的理念，为该技术的实际应用提供了广阔的前景。未来，研究人员计划进一步探究 OFE 对水牛精液体内和体外受精能力的影响，为其在商业养殖中的应用奠定更坚实的基础。
