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为探究核苷（酸）类似物（NUC）影响乙肝病毒（HBV）整合的机制，来自香港的研究人员用 ETV 处理含 HBV DNA 的肝癌细胞，发现 ETV 或通过抑制磷酸化组蛋白 H3 表达减少 HBV 整合。
慢性乙肝（CHB）感染是一个重大的健康问题，全球估计有 2.57 亿人受其影响（世界卫生组织，2023 年）。CHB 常常会导致肝硬化和肝细胞癌（HCC），这是肝脏相关发病率和死亡率的主要原因。乙肝病毒（HBV）DNA 可以整合到宿主基因组中。虽然 HBV DNA 整合到宿主基因组并非 HBV 复制周期中的必要步骤，但它会导致染色体不稳定，并增强某些癌基因的表达（Jiang 等人，2012 年），使得 HBV 整合成为 HBV 诱导肝癌发生过程中的一个重要事件。整合位点的病毒热点靠近 HBV 直接重复序列 1（DR1）或 DR2 区域（Tu 等人，2017 年）。核苷（酸）类似物（NUC）是常用的慢性乙肝（CHB）一线治疗药物，能显著抑制 HBV 复制，在 CHB 患者中产生良好的病毒学和生化反应（Yuen 等人，2018 年）。NUC 是逆转录酶抑制剂，可抑制从 HBV 前基因组 RNA（pgRNA）产生子代 HBV DNA。整合的 HBV DNA 并非 NUC 的直接作用靶点，因此 NUC 对整合的 HBV DNA 的影响研究较少。在最近的一份报告中，研究人员证实 CHB 患者接受抗病毒（NUC）治疗后，HBV DNA 整合程度有所降低（Chow 等人，2023 年）。然而，NUC 导致 HBV 整合减少的机制和分子基础尚不清楚。
为了解决这个问题，研究人员以恩替卡韦（ETV）的形式，研究 NUC 对含有工程化整合 HBV DNA 的肝癌细胞中 HBV 整合的影响。研究人员对比了 ETV 处理和未处理细胞的 HBV DNA 整合情况以及细胞特性，为理解 CHB 患者中 ETV 治疗导致 HBV 整合减少的机制提供了线索。
肝癌 HepG2 细胞购自美国典型培养物保藏中心（ATCC，美国弗吉尼亚州马纳萨斯），在添加有 10% 胎牛血清和 10 U/mL 青霉素 - 链霉素（赛默飞世尔科技，美国马萨诸塞州沃尔瑟姆）的杜氏改良 Eagle 培养基（DMEM）中，于 37°C、5% CO2的湿润培养箱中培养。研究人员使用针对总聚（ADP - 核糖）聚合酶（总 PARP）、裂解的 PARP、总 caspase - 3 和裂解的 caspase - 3、磷酸化细胞分裂控制蛋白 2（cdc - 2）和磷酸化组蛋白的抗体进行后续实验。
研究人员通过针对 HBV 基因组部分序列和 1xHBV_pSBi - CloverPUR_HBV_Myc 质粒 ITR 区域的引物进行 PCR，验证了 HepG2/SB/HBV 细胞中转座子介导的 HBV DNA 整合的存在。当以从 HepG2 和 HepG2/SB/ 载体中提取的细胞 DNA 为模板时，未获得可见的 PCR 产物。相反，以 HepG2/SB/HBV 为模板进行扩增时，得到了预期大小约为 500 bp 的 PCR 条带，这表明存在转座子介导的 HBV DNA 整合。
NUC 能有效抑制 CHB 患者的 HBV 复制，但对 HBV 整合的影响尚不清楚。在之前的报告中（Chow 等人，2023 年），研究人员证实了 NUC 治疗可降低 CHB 患者的 HBV DNA 整合程度。在当前的研究中，研究人员进行了体外实验，利用含有转座子介导的 HBV DNA 插入的工程化 HepG2 细胞，研究 ETV 对 HBV DNA 整合的影响。与 CHB 患者的情况类似，这些工程化细胞实验表明……（此处原文部分内容缺失，可根据完整原文补充后续内容）
总之，在含有整合 HBV DNA 的工程化肝癌细胞中，ETV 通过抑制磷酸化组蛋白 H3 的表达，选择性地抑制这些细胞的有丝分裂，而对不含 HBV 的肝癌细胞则没有影响。这可能是接受 ETV 治疗的 CHB 患者中 HBV 整合减少的机制。
Danny Ka - Ho Wong：撰写 - 审阅与编辑、撰写 - 初稿、方法学、调查、形式分析、数据管理、概念化。Ning Chow：调查、形式分析、数据管理。Hoi Tang Ma：方法学、数据管理、概念化。Ka Yan Wong：方法学、调查、数据管理。Lung - Yi Mak：撰写 - 审阅与编辑。Wai - Kay Seto：撰写 - 审阅与编辑、监督。Man - Fung Yuen：撰写 - 审阅与编辑、监督、获取资金。
研究人员声明存在以下可能被视为潜在利益冲突的财务利益 / 个人关系：MF Yuen 是美国 AbbVie、加拿大 Arbutus Biopharma、美国 Assembly Biosciences、美国百时美施贵宝（Bristol Myer Squibb）、美国 Dicerna Pharmaceuticals、英国葛兰素史克（GlaxoSmithKline）、美国吉利德科学（Gilead Sciences）、比利时杨森（Janssen）、美国默沙东（Merck Sharp and Dohme）的顾问委员会成员，并 / 或从这些公司获得研究资金。
这项工作得到了香港特别行政区政府研究资助局的一般研究基金（参考编号：17108921）和香港特别行政区政府卫生署卫生及医学研究基金（参考编号：07183616）的支持。
