靶向间皮素且分泌 NKG2D-BiTEs 的 CAR-T 细胞：三阴性乳腺癌治疗的新希望

为解决三阴性乳腺癌（TNBC）治疗难题，研究人员开发新型 BiTEs CAR-T 细胞，其疗效显著，有临床应用潜力。

　　在癌症治疗的战场上，三阴性乳腺癌（Triple-negative breast cancer，TNBC）可谓是一块难啃的 “硬骨头”。它是乳腺癌中最恶性的亚型，预后极差 ，患者常常面临有限的治疗选择，治疗效果也不尽如人意。传统治疗手段在 TNBC 面前逐渐显得力不从心，而新兴的嵌合抗原受体 T 细胞（Chimeric Antigen Receptor T-cell，CAR-T）疗法，虽然为癌症治疗带来了新的曙光，但在 TNBC 的治疗中却遭遇了肿瘤抗原逃逸和抗原异质性的阻碍，使得其疗效大打折扣。在这样的困境下，为了给 TNBC 患者寻找更有效的治疗方案，中国科学院深圳先进技术研究院的研究人员挺身而出，开展了一项极具意义的研究。他们开发出一种新型的双特异性 T 细胞衔接器 CAR-T（BiTEs CAR-T），该细胞靶向间皮素（Mesothelin，MSLN）并分泌 NKG2D 双特异性 T 细胞衔接器（BiTEs）来结合 NKG2D 配体（NKG2D Ligands，NKG2DL）。这项研究成果发表在《Experimental Hematology & Oncology》杂志上，为 TNBC 的治疗开辟了新的道路。

研究人员在开展这项研究时，运用了多种关键技术方法。他们借助癌症基因组图谱（The Cancer Genome Atlas，TCGA）和肿瘤微阵列分析 TNBC 组织，以此了解 MSLN 和 NKG2DL 的表达情况。同时，通过构建不同的细胞系，如 MICA 过表达的 MDA-MB-231（MDA-MB-231MICA）细胞等，来评估 BiTEs CAR-T 细胞的功能。还利用斑马鱼和免疫缺陷小鼠模型，在体内验证 BiTEs CAR-T 细胞的抗肿瘤活性 。此外，采用蛋白质免疫印迹（Western blot）、酶联免疫吸附测定（ELISA）和流式细胞术等技术，对细胞的相关指标进行检测分析。

研究结果如下：

• 靶点分析：通过对 TCGA 数据的分析以及免疫组化验证发现，TNBC 组织中 MSLN 和 NKG2DL 呈高表达，但二者的表达相关性较弱。在临床队列中，71.05% 的 TNBC 样本 MSLN 呈阳性，55.26% 的样本 MICA/B 呈阳性，仅 15.79% 的样本二者均为阴性。这一结果表明，MSLN 和 NKG2DL 是 TNBC 双靶点治疗的理想选择。
• 细胞构建及特性：研究人员设计并成功制备了 MSLN 靶向且分泌 NKG2D-BiTEs 的 CAR-T 细胞（BiTEs CAR-T）。为降低免疫原性和聚集风险，该细胞构建中使用了纳米抗体（VHH）靶向 MSLN，利用 NKG2D 的细胞外结构域靶向 NKG2DL，使得 BiTEs CAR-T 具备低免疫原性和高稳定性的优势。
• 体外细胞实验：在体外实验中，BiTEs CAR-T 细胞展现出卓越的性能。与 MSLN CAR-T 细胞相比，它对异质性靶细胞具有更强的细胞毒性，能够更有效地激活 T 细胞，并且分泌更多的细胞因子，如 IFN-γ、TNF-α、IL-2、颗粒酶 A、颗粒酶 B、穿孔素和颗粒溶素等。研究人员通过多种细胞系实验，包括 MDA-MB-231MICA、293T^MICA、4T1^MSLN 以及 MDA-MB-468、HCT116、HeLa 和 MDA-MB-231^MSLN等，均证实了 BiTEs CAR-T 细胞的优势。
• 体内动物实验：斑马鱼异种移植模型和免疫缺陷小鼠模型实验结果显示，BiTEs CAR-T 细胞在体内同样具有强大的抗肿瘤活性。在斑马鱼模型中，BiTEs CAR-T 细胞显著降低了肿瘤的荧光强度，证明其能够促使肿瘤消退；在小鼠模型中，BiTEs CAR-T 细胞有效减小了肿瘤体积，延长了小鼠的生存期，且未引起明显的体重下降。同时，接受 BiTEs CAR-T 细胞治疗的小鼠血液中 IFN-γ 水平更高，CD3⁺ T 细胞百分比增加，表明该细胞在体内具有较强的持久性和效力。

研究结论与讨论部分指出，BiTEs CAR-T 细胞凭借其低免疫原性和高稳定性的特点，在针对异质性 TNBC 的治疗中表现出了优异的抗肿瘤活性，为 TNBC 的治疗提供了一种极具前景的策略，有望转化应用于临床治疗。不过，目前 BiTEs CAR-T 细胞在小鼠模型中的疗效仍存在一定局限性，可能与肿瘤的侵袭性或 CAR-T 细胞的剂量有关。未来研究可以考虑将 BiTEs CAR-T 细胞与化疗或未转导的 T 细胞（UTD）联合使用，以增强治疗效果。此外，鉴于 BiTEs CAR-T 细胞的双靶向特性，进一步评估其潜在的毒性，如脱靶效应和细胞因子释放综合征等，至关重要。总体而言，这项研究成果为 TNBC 的治疗带来了新的希望，为后续的临床研究和治疗方案的优化奠定了坚实的基础。