精准锁定：非酒精性脂肪肝小鼠内脏脂肪组织中稳健内参 miRNA 的筛选策略

为解决 PCR 实验中内参选择问题，研究人员筛选出 C57BL/6J 小鼠相关内参 miRNA，提供可靠策略。

　　在 PCR 实验设计中，尤其是差异表达研究里，选择合适的参考基因和材料至关重要。本研究提出了一种方法，用于鉴定由西式饮食和对照饮食交替诱导的非酒精性脂肪肝（NAFLD）的 C57BL/6J 小鼠内脏脂肪组织中稳健的内源性对照微小核糖核酸（miRNA） 。该研究概述了一种综合方法，通过微流控芯片结合小 RNA 测序进行微小核糖核酸内源性对照分析，并随后通过定量聚合酶链式反应（qPCR）和 RefFinder 算法进行验证。所纳入的标准包括倍数变化、p 值、每百万 reads 数以及基因稳定性评估。研究鉴定出了一组 6 个假定的内源性微小核糖核酸（miR-331-3p、let-7a-5p、miR-1839-5p、miR-151a-5p、let-7d-5p 和 let-7c-5p ）。随后利用 RefFinder 算法进行的验证和分析评估了所选基因的稳定性，并确定了由 3 个最稳定的内源性微小核糖核酸对照（miR-331-3p、let-7a-5p 和 miR-1839-5p ）组成的组合，它们表现出一致的表达模式且变异性最小。鉴于不存在通用的内源性对照，为了准确测量微小核糖核酸的表达，针对每个实验单独评估标准化因子势在必行。这种结合多种技术和评估的方法，为微小核糖核酸研究中鉴定和验证内源性对照提供了可靠的策略。