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为准确鉴定蠕虫寄生虫，研究人员开展整合分类学研究，明确了流程与局限，推动寄生虫学发展。
在生物多样性的研究领域中，物种的准确鉴定与分类一直是关键课题。传统的分类学主要依赖比较形态学，但随着分子生物学的崛起，DNA 条形码技术逐渐普及。这一技术的出现，让人们开始思考：分子分析是否会彻底取代传统的系统分类学方法？在寄生虫学领域，尤其是蠕虫（Helminth）研究中，这个问题更为突出。过去，仅依靠形态特征和生态信息来分析蠕虫，导致了许多不准确的描述。大量 DNA 序列在数据库中存在错误或不完整的鉴定，新物种数量也存在 “膨胀” 的现象 。
为了解决这些问题，来自哥斯达黎加大学（University of Costa Rica）等机构的研究人员 Alicia Rojas、Laura G. Bass 等人开展了关于整合分类学（Integrative taxonomy）在蠕虫分析中应用的研究。他们的研究成果发表在《Parasites & Vectors》杂志上，为蠕虫寄生虫的研究带来了新的思路和方法。
研究人员在开展这项研究时，运用了多种关键技术方法。在样本采集方面，根据动物种类、器官受影响情况和动物状态的不同，采用不同的采集方式，如对野生动物进行尸检、对家养动物进行身体检查和粪便分析等。在样本处理上，针对不同的蠕虫类型，使用特定的固定和染色方法，如线虫常用乳酸酚（lactophenol）或阿曼乳酸酚（lactophenol of Amann）处理，吸虫和绦虫则用盐酸卡红（hydrochloric carmine）染色。同时，利用扫描电子显微镜（SEM）观察蠕虫的表面微观结构，通过组织病理学分析确定寄生虫与宿主病变的关系，还运用 DNA 分析技术获取线粒体或核糖体基因座的 DNA 条形码进行物种鉴定。
下面来看看具体的研究结果：
- 整合分类学的应用现状：整合分类学自 2005 年提出后，在蠕虫学领域的应用逐渐增多。通过对 NCBI 数据库中相关文章的分析发现，巴西、墨西哥和中国发表的相关文章数量较多。研究涉及的宿主种类多样，线虫主要研究哺乳动物、植物和鱼类宿主；吸虫超过 50% 的研究集中在鱼类宿主；绦虫则在鱼类和哺乳动物宿主中均有分析。不过，目前研究中对组织病理学特征、流行病学或生态因素的考虑较少。
- 样本采集与保存：样本采集方法因动物而异。家养动物可通过体检、粪便分析等方式检查寄生虫；野生动物则多通过尸检获取样本，但受伦理和物种保护限制。采集到的样本在固定前需进行放松处理，以利于后续的形态测量分析。此外，不同的样本保存方式对后续分析有不同影响，如福尔马林固定虽有助于组织病理学研究，但会降低 DNA 质量，而乙醇保存更适合分子鉴定。
- 固定与染色：不同的蠕虫群体需要不同的固定和染色方案。线虫通常用乳酸酚等溶液进行透明处理，以便观察形态；吸虫和绦虫常用盐酸卡红染色，染色时至少要对每种性别的十个标本进行处理，以准确估计形态结构的均值和标准差，帮助物种鉴定 。
- 扫描电子显微镜观察：SEM 能够观察到蠕虫表面微观结构的区域差异，这是光学显微镜无法做到的。其样本制备有特定流程，包括固定、脱水、用抗静电剂处理和镀金或钯等步骤。在操作过程中，要注意避免损坏蠕虫的表皮和体壁，可使用牙科探针转移样本。
- 组织病理学分析：通过组织病理学分析，可以确定寄生虫与宿主病变的共定位关系，判断寄生虫的致病作用。在分析过程中，要注意观察寄生虫的特征结构，如体腔、消化系统等，这些结构有助于区分不同的寄生虫类别。不过，组织病理学分析也存在一定局限性，有时需要结合 PCR 和测序等技术进行更准确的诊断。
- 分类学与生态学的关系：分类学、生态学和生物地理学之间存在双向关系。错误的物种鉴定会影响生态和生物地理知识的准确性，而缺乏生态信息也会阻碍物种分类。因此，在物种鉴定时，应尽可能纳入生态和生物地理信息，如利用地理信息系统（GIS）和遥感（RS）技术获取相关数据。
- DNA 分析：获取高质量的 DNA 样本对分子研究至关重要。样本应避免接触福尔马林，可保存在≥70% 的乙醇中。DNA 提取方法因样本类型而异，如粪便样本中的虫卵可采用特殊试剂盒提取 DNA，同时可添加玻璃珠等辅助机械裂解虫卵外壳。扩增特定的 DNA 区域，如线粒体和核糖体标记，有助于物种鉴定，通过与数据库中的序列比对，并进行系统发育分析，可推断蠕虫的进化历史。
- 标本鉴定与二分检索表：物种定义复杂，整合分类学应综合多方面信息进行物种鉴定和界定。二分检索表可用于标本分类，但使用时研究人员需准确识别形态结构。近年来，整合分类学方法发现的新物种数量增加，但当形态和分子差异无法确定物种分类时，需进一步分析 。
综上所述，研究人员通过对整合分类学在蠕虫分析中的应用研究，明确了该方法的主要流程和原则，包括样本采集、固定染色、显微镜观察、组织病理学分析、DNA 分析等方面的具体操作。同时也指出了该方法存在的局限性，如不同实验室的操作流程差异、部分样本处理方法不适用于所有宿主等。这项研究的意义重大，它推动了蠕虫寄生虫研究从单一方法向多学科整合的方向发展，提高了物种鉴定的准确性，有助于深入理解蠕虫的进化和分类，为寄生虫学领域的研究提供了重要的参考和指导，为后续的寄生虫防控和生物多样性保护等工作奠定了坚实基础。
