利用 CRISPR/Cas9 可回收系统构建无标记绿僵菌菌株，开启生物防治新篇章

《Folia Microbiologica》：Metarhizium anisopliae engineering mediated by a CRISPR/Cas9 recyclable system

为解决 CRISPR/Cas 技术在绿僵菌基因编辑难题，研究构建无标记菌株，助力生物防治研究。

　　CRISPR/Cas 技术的出现革新了基因组编辑（Genome Editing），它具备操作简单、精准度高以及成本效益好等优势。尽管该技术在生物防治真菌领域的应用存在局限，像在全球广泛分布的真菌绿僵菌（Metarhizium anisopliae）中应用较少，但近期的进展却展现出良好前景。不过，将 cas9 和选择标记基因整合到真菌基因组时面临诸多挑战，例如效率降低、存在毒性以及脱靶效应等问题。此外，通过 CRISPR 可回收系统进行无标记基因工程，为高效生成突变体提供了可行方案，且不会损害真菌的适应性和毒力。本研究率先利用 CRISPR/Cas9 可回收系统构建了绿僵菌的无标记菌株。对 albA 和 ku70 基因的精准缺失，以及绿色荧光蛋白（gfp）表达盒的插入，证实了该系统的有效性。这种创新方法在推动深入的分子研究、探究绿僵菌在农业系统中的生态作用，以及通过基因改良增强其对害虫的生物防治效果等方面，都具有巨大潜力。