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为探究 GPR132 对 NK 细胞功能的影响，研究人员开展相关研究，发现其经特定信号轴调控，或助力 NK 细胞疗法。
在肿瘤治疗的战场上，免疫疗法近年来可谓大放异彩，像细胞因子疗法、免疫检查点阻断（IBD）、过继细胞疗法、癌症疫苗、单克隆抗体以及嵌合抗原受体（CAR）疗法等，为无数患者带来了新的希望。其中，免疫检查点阻断疗法，通过靶向免疫抑制 “检查点” 受体，改写了癌症治疗的传统模式，让人们看到了攻克癌症的曙光。然而，现实却并不总是如人所愿。尽管 NK 细胞在肿瘤免疫治疗中潜力巨大，它无需预先接触癌细胞就能识别并发动攻击，而且异基因 NK 细胞还不会引发免疫排斥反应，为肿瘤治疗开辟了新路径。但目前临床上，多数患者对免疫检查点抑制剂存在耐受性，过继 NK 细胞疗法在实体瘤治疗中的效果也不尽人意。因此，寻找新的免疫检查点，增强 NK 细胞的抗肿瘤免疫反应，成为了肿瘤免疫治疗领域亟待解决的难题。
为了攻克这一难题，华东师范大学的研究人员开展了深入研究。他们将目光聚焦于 G 蛋白偶联受体 132（GPR132），试图揭开它与 NK 细胞之间的神秘联系。最终，研究成果发表在《SCIENCE ADVANCES》上，为肿瘤免疫治疗带来了新的希望。
在这项研究中，研究人员运用了多种关键技术方法。首先，通过 RNA 测序（RNA-seq）技术，分析激活前后 NK 细胞的基因表达变化，筛选出与 NK 细胞功能相关的基因。其次，利用基因编辑技术构建 GPR132 基因敲除（GPR132?/?）小鼠模型，在体内研究 GPR132 对 NK 细胞功能的影响。此外，借助细胞培养、细胞转染和流式细胞术等技术，在体外探究 GPR132 对 NK 细胞的增殖、凋亡、细胞毒性等功能的调控机制。研究样本中的人外周血单个核细胞（PBMCs）来源于上海血液中心，实验小鼠则在特定条件下饲养和使用。
下面来看看具体的研究结果：
- GPR132 在 NK 细胞激活后表达下降：研究人员从人外周血单个核细胞中分离出原代 NK 细胞，用离子霉素和佛波酯（PMA）刺激处理后进行 RNA-seq 分析。结果发现，激活后的 NK 细胞中有 3446 个差异表达基因，其中 GPR132 显著下调。对 NK92 细胞系进行刺激实验，并通过逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白质免疫印迹（WB）检测，也得到了相同的结果。由此推测，GPR132 可能与 NK 细胞功能调节有关。
- 敲除 GPR132 增强小鼠 NK 细胞抗黑色素瘤功能：通过流式细胞术分析发现，GPR132?/?小鼠外周血、脾脏等器官中的 NK 细胞比例显著增加，且脾脏中成熟 NK 细胞（CD27?CD11b+ NK 细胞）的数量和比例也明显上升。将 B16-F10 黑色素瘤细胞接种到小鼠体内建立荷瘤模型，结果显示 GPR132?/?小鼠的肿瘤体积和重量更小，生存率更高，肿瘤浸润 NK 细胞数量更多，且这些 NK 细胞表达更多的颗粒酶 B（GzmB）和干扰素 -γ（IFN-γ）。骨髓移植实验和黑色素瘤肺转移实验进一步证实，GPR132 缺失可通过 NK 细胞促进小鼠的抗肿瘤能力。
- GPR132 缺陷增强 NK 细胞的细胞毒性和激活：体外实验中，将野生型（WT）和 GPR132?/?小鼠的脾脏 NK 细胞与 Yac-1 细胞共培养，发现 GPR132 缺失的 NK 细胞杀伤效率更高，且 CD107a、GzmB 和 IFN-γ 的表达增加。在 NK92 细胞中设计针对 GPR132 的短发夹 RNA（shRNA）干扰序列，干扰 GPR132 表达后，与 K562 细胞共培养，结果显示干扰组（SH-NK92）细胞对 K562 细胞的杀伤能力更强，且相关激活标志物表达更高，在原代人 NK 细胞中也得到了类似结果。
- 激活 GPR132 抑制 NK 细胞的细胞毒性和激活：用 GPR132 的选择性激动剂 ONC212 处理 NK92 细胞、NC-NK92 细胞和 SH-NK92 细胞，发现 ONC212 处理后 NK92 细胞的杀伤效率显著降低，CD69 和 CD107a 表达下降，而 GPR132 敲低后这种抑制作用消失。由于肿瘤微环境（TME）中产生的乳酸会抑制免疫细胞功能，且 GPR132 被认为可被乳酸激活，研究人员用乳酸处理 NC-NK92 细胞和 SH-NK92 细胞后发现，GPR132 缺陷的 SH-NK92 细胞仍能保持较好的杀伤能力和激活水平，表明 GPR132 激活会抑制 NK 细胞功能，而其缺陷可减弱乳酸对 NK 细胞的抑制作用。
- GPR132 影响 NK 细胞的增殖和抗凋亡能力：在人 NK92 细胞中，敲低 GPR132 后增殖抗原 Ki67 的表达丰度显著增加，且在无重组人白细胞介素 - 2（hIL-2）培养时，SH-NK92 细胞的凋亡减少，抗凋亡蛋白 Bcl-2 表达增加。相反，用 ONC212 处理 NK92 细胞后，Ki67 表达降低，细胞凋亡率增加，Bcl-2 表达下降。这表明 GPR132 可调节 NK 细胞的增殖和凋亡，GPR132 缺陷能增强 NK 细胞在无 IL-2 情况下的抗凋亡能力和存活能力。
- GPR132 通过 Gαs/CSK/ZAP70/NF-κB 信号轴调节 NK 细胞功能：研究发现，ZAP70 基因在 NK 细胞激活时显著上调且富集于 NF-κB 通路，而 ZAP70 受 CSK 调节。通过对 GPR132 进行下调或激活处理后检测相关蛋白表达，发现 GPR132 正调控 CSK 表达，负调控 pZAP70 和 p-P65 表达。使用 CSK 降解剂和 ZAP70 抑制剂处理细胞进一步验证了该信号通路的调控关系，且 NF-κB 抑制剂可显著降低 SH-NK92 细胞中 GzmB、IFN-γ 和穿孔素的表达。这表明 GPR132 通过 Gαs/CSK/ZAP70/NF-κB 信号通路调节 NK 细胞功能。
- 下调 GPR132 增强 CAR-NK 细胞的细胞毒性和激活：研究人员构建了敲低 GPR132 的 NKG2D/4-1BBζ-NK 细胞（CAR-NK92 细胞），并与结直肠癌细胞系 HCT116 和 HCT15 共培养。结果显示，表达 CAR 的 NK92 细胞能有效杀伤靶细胞，且 SH-CAR-NK92 细胞的细胞毒性更强，相关激活标志物和细胞因子表达更高。即使经乳酸处理 12 小时后，SH-CAR-NK92 细胞的杀伤能力仍强于 NC-CAR-NK92 细胞，表明下调 GPR132 可增强 CAR-NK 细胞功能，减弱乳酸对其功能的抑制作用。
- 敲低 GPR132 增强 CAR-NK92 细胞的体内抗肿瘤活性：选用 HCT116 细胞建立结直肠癌异种移植小鼠模型，将小鼠分为四组，分别给予 PBS、Mock-NK92 细胞、NC-CAR-NK92 细胞和 SH-CAR-NK92 细胞处理，并腹腔注射 hIL-2。结果显示，SH-CAR-NK92 细胞在体内具有显著的抗肿瘤能力，接受该细胞治疗的小鼠肿瘤体积更小，生存率更高，肿瘤浸润 NK 细胞比例更高，且相关激活标志物和细胞因子表达显著升高。这明确证明下调 GPR132 可有效提高 CAR-NK 细胞在体内的抗结直肠癌疗效。
研究结论和讨论部分指出，GPR132 受体通过 Gαs/CSK/ZAP70/NF-κB 信号轴调节 NK 细胞功能，GPR132 缺陷可减弱乳酸对 NK 细胞的抑制作用，增加 INF-γ 和 GzmB 的表达，有效增强 CAR-NK92 细胞的抗结直肠癌效果。这一研究成果更确凿地证明了 GPR132 是一个潜在的免疫检查点，为 NK 细胞治疗提供了新的途径，有望改善肿瘤免疫治疗的现状，为癌症患者带来更多的治疗选择和更好的治疗效果。
