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研究人员针对器官移植中同种抗体作用不明问题，研究 HLA-A11:01 特异性单抗，发现 1H5 抗体可抑制 T 细胞反应，或助力移植治疗。
在器官移植领域，它就像一场与人体免疫系统的 “博弈”。随着医学技术的飞速发展，器官移植已经成为众多器官衰竭患者的 “救命稻草”，为他们带来了新的生机。然而，人体复杂而精密的免疫系统却成为了这一治疗手段的 “拦路虎”。其中，适应性免疫系统中的同种反应性 T 细胞以及针对人类白细胞抗原（HLA）的抗体，是导致移植器官被排斥的主要原因。
一直以来，人们发现，只要体内存在抗供体 HLA 抗体，就如同给移植手术埋下了一颗 “定时炸弹”，往往会被视为不适合进行特定供体 - 受体配对的危险因素。但奇怪的是，在一些长期存活的移植受者体内，同样能检测到同种抗体，这似乎暗示着这些抗体有着不为人知的 “另一面”—— 可能具有保护移植器官的功能。于是，一个关键问题摆在了科研人员面前：同种抗体在移植过程中究竟是 “天使” 还是 “恶魔”？它对移植结果的影响究竟是好是坏？这个问题就像一团迷雾，笼罩着器官移植领域，亟待科研人员去揭开它神秘的面纱。
为了驱散这团迷雾，来自新加坡国立大学、牛津大学、奥古斯塔大学等多个研究机构的研究人员（Maryam Hamidinia、Yue Gu 等）展开了深入研究。他们的研究成果发表在《Cellular and Molecular Life Sciences》杂志上，为我们带来了全新的认识。
在这场科研探索之旅中，研究人员采用了多种先进的技术方法。首先是噬菌体展示技术，这一技术就像是一个 “抗体筛选器”，帮助研究人员从非免疫人类文库中成功筛选出 HLA-A11:01 特异性单克隆抗体（mAbs）。接着，他们运用了细胞培养和刺激技术，通过精心培养和刺激细胞，获得了 A11:01 限制性同基因 T 细胞和表达特定 TCR 的 T 细胞系，为后续研究提供了关键的细胞模型。另外，交叉连接质谱（XL-MS）和分子对接技术也发挥了重要作用，它们就像科研人员手中的 “显微镜”，帮助研究人员精准地确定抗体与 HLA-A*11:01 的结合位点以及相互作用的结构基础。
研究人员首先进行了抗体的发现、表达和纯化工作。HLA-A11:01 在东南亚地区人群中是较为常见的等位基因，在新加坡的移植手术中，它作为不匹配的 HLA 抗原具有重要的临床意义。研究人员利用噬菌体 - Fab 展示方法，从三十多位健康新加坡捐赠者的幼稚 B 细胞建立的噬菌体 - Fab 文库中，经过多轮筛选，成功获得了 HLA-A11:01 特异性 mAbs，并通过一系列实验验证了其纯度和特异性。
随后，研究人员开始探究这些抗体对 T 细胞的影响。他们通过体外刺激和扩增，成功获得了 A11:01 限制性同基因 T 细胞。实验发现，这些 T 细胞能够特异性地对 EBV EBNA-3BNP 肽作出反应。在此基础上，研究人员评估了抗 A11:01 mAbs 对 EBV-EBNA-3BNP CD8? T 细胞激活的抑制能力。他们发现，在混合的五种抗 A*11:01 mAbs 中，有一种名为 1H5 的抗体表现出了显著的抑制作用。进一步研究发现，1H5 抗体能够抑制 T 细胞产生 TNF 和 IFNγ 细胞因子，从而有效抑制 T 细胞的激活。
为了更深入地了解 1H5 抗体的作用机制，研究人员构建了表达特定 TCR 的 T 细胞系。他们设计了一种重组慢病毒构建体，将其转导到 Jurkat 76 细胞中，成功获得了表达针对 HLA-A*11:01 的 EBV 特异性 TCR 的 T 细胞系。通过与不同的人工抗原呈递细胞（APCs）共培养实验，研究人员发现，1H5 抗体能够显著降低 T 细胞在受到刺激时产生 IL-2 的水平，这进一步证明了 1H5 抗体对 T 细胞激活的抑制作用。
接着，研究人员深入研究了 1H5 抗体对 T 细胞信号通路的影响。T 细胞的激活涉及多种转录因子的核转位，其中核因子活化 T 细胞（NFAT）和丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路中的细胞外信号调节激酶（ERK）起着关键作用。研究人员利用成像流式细胞术发现，1H5 抗体能够明显抑制 NFAT 的核转位以及 pERK 向细胞核的转位，这表明 1H5 抗体能够有效抑制 T 细胞信号转导，从源头阻断 T 细胞的激活。
在探究 1H5 抗体对免疫突触形成的影响时，研究人员最初尝试利用全内反射荧光（TIRF）显微镜进行实验，但由于 1H5 抗体阻断了 TCR 与 MHC 的相互作用，导致实验无法进行。不过，这也从侧面证明了 1H5 抗体抑制 T 细胞与抗原相互作用的能力。随后，研究人员改用落射荧光显微镜进行观察，结果发现 1H5 抗体能够特异性地抑制 TCR 与 A*11:01 的结合，同时不影响 CD8 与 MHC-I 分子的相互作用，这为解释 1H5 抗体的作用机制提供了重要线索。
最后，研究人员利用 XL-MS 和分子对接技术，对 1H5 抗体与 A11:01 的结合位点进行了预测和建模。他们发现，1H5 抗体的结合位点靠近预测的表位，并且与 TCR 的结合位点存在重叠，这种重叠会导致空间位阻，从而阻止 TCR 与 A11:01 的结合。这一发现为 1H5 抗体阻断 TCR 与 HLA-A*11:01 的结合提供了有力的结构基础证据。
综合以上研究结果，研究人员得出结论：某些 HLA 特异性同种抗体，如 1H5 抗体，能够有效减少 T 细胞对同种异体移植物的反应。这一发现对于理解供体特异性抗体（DSA）的存在意义重大，它表明并非所有的 DSA 都会对移植结果产生负面影响，有些 DSA 可能具有保护移植器官的作用。同时，这一研究成果也为器官移植治疗带来了新的希望。1H5 抗体或具有类似特性的抗体，有可能成为治疗器官移植排斥的新型药物，为提高移植器官的存活率提供新的策略。未来，研究人员还将进一步探索这些抗体在临床应用中的潜力，以及它们对 T 细胞分化和免疫反应的长期影响，为器官移植领域的发展开辟新的道路。
