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为探究胰腺癌吉西他滨（GEM）耐药机制，研究人员聚焦 RNA 结合蛋白，发现 Pumilio2（PUM2）促耐药，为治疗提供新思路。
胰腺癌，一个隐匿在身体深处的 “杀手”，发病隐匿、进展迅速，预后极差，5 年生存率不到 12%。手术切除曾是治愈的唯一希望，但多数患者确诊时已错过时机。吉西他滨（GEM）联合方案成为临床化疗一线选择，可术后 3 年 GEM 耐药比例高达 78.6%，这就像一道难以跨越的鸿沟，严重阻碍了胰腺癌治疗的步伐。探寻 GEM 耐药机制、提高药物敏感性、逆转耐药成为亟待解决的关键问题。
在这样的背景下，中国医学科学院北京协和医院的研究人员勇敢地踏上了探索之旅。他们的研究成果发表在《Cellular and Molecular Life Sciences》上，为胰腺癌治疗带来了新的曙光。
研究人员运用了多种关键技术方法。他们从 82 例胰腺癌患者手术获取的组织样本入手，还使用了多种胰腺癌细胞系。通过 siRNA 文库筛选、RNA 测序（RNA-seq）、RNA 免疫沉淀（RIP）等技术，从不同角度深入剖析胰腺癌吉西他滨耐药的奥秘。
下面我们来详细看看他们的研究结果。
- PUM2 在胰腺癌化疗耐药中起关键作用：研究人员对比了 GEM 耐药细胞系 AsPC-1/GEM 和其亲本细胞系 AsPC-1，发现 AsPC-1/GEM 对 GEM 明显耐药。经转录组测序和生物信息学分析，筛选出 23 个可能与 GEM 耐药相关的 RNA 结合蛋白（RBPs）。通过 siRNA 文库转染实验，发现敲低 PUM2 后，胰腺癌细胞对 GEM 的敏感性显著增加，且 PUM2 在胰腺癌组织中高表达，与患者预后不良相关。进一步分析还发现，PUM2 表达与肿瘤细胞分化程度、T 分期密切相关，是影响患者长期生存的独立风险因素。
- PUM2 促进胰腺癌细胞增殖、迁移和化疗耐药：研究人员构建了稳定敲低和过表达 PUM2 的胰腺癌细胞系，进行功能实验。结果显示，敲低 PUM2 可显著抑制胰腺癌细胞增殖和迁移，增加细胞对 GEM 的敏感性；而过表达 PUM2 则促进细胞增殖、迁移，降低细胞对 GEM 的敏感性。在小鼠皮下异种移植瘤模型中也验证了 PUM2 对肿瘤生长和 GEM 敏感性的影响。
- RNA-seq 和 RIP-seq 揭示 PUM2 在胰腺癌中的 RNA 调控功能：RNA-seq 结果表明，敲低 PUM2 后，多个基因表达发生变化，涉及细胞粘附连接、粘着斑通路等。RIP-seq 发现 PUM2 主要结合在基因的 3′UTR 区域和 CDS 区域，且与粘着斑通路、Wnt 信号通路等相关基因结合。综合分析确定 ITGA3 及粘着斑通路基因集可能是 PUM2 调节胰腺癌 GEM 耐药的下游靶点。
- PUM2 在 mRNA 水平调控胰腺癌粘着斑通路：通过 qRT-PCR、RIP-qPCR 和 RNA 稳定性实验证实，PUM2 可结合 ITGA3、ADAM17 等粘着斑通路相关基因的 3′UTR 区域，提高其 mRNA 稳定性，从而上调基因表达。
- ITGA3 是 PUM2 在胰腺癌中的关键下游基因：双荧光素酶报告实验证明 PUM2 可结合 ITGA3 mRNA 的 3′UTR 区域的 PBE 序列。敲低 PUM2 后，ITGA3 及 AKT 通路关键基因蛋白水平下降，而过表达 ITGA3 可逆转敲低 PUM2 对胰腺癌细胞 GEM 敏感性和迁移能力的影响。
- EGR1 和 PUM2 相互调节产生级联效应：通过数据库预测和实验验证，发现转录因子 EGR1 与 PUM2 相互调节。敲低或过表达 PUM2 会影响 EGR1 表达，反之亦然。RIP-qPCR 证实 PUM2 可结合 EGR1 mRNA 的 3′UTR 区域。在敲低 PUM2 的细胞中过表达 EGR1，可逆转细胞对 GEM 敏感性和迁移能力的变化。
研究人员通过一系列实验，证实了 PUM2 是诱导胰腺癌 GEM 耐药的关键 RNA 结合蛋白。PUM2 可通过调节 ITGA3 等粘着斑通路相关基因，促进胰腺癌的化疗耐药和细胞迁移。同时，PUM2 与转录因子 EGR1 相互调节，形成一个复杂的调控网络。这一发现为理解胰腺癌 GEM 耐药机制提供了新的理论基础，也为提高胰腺癌 GEM 化疗效果提供了新的思路，有望推动胰腺癌治疗方法的进一步发展。
