巧用微卫星多重 PCR 技术精准检测太平洋牡蛎（Crassostrea gigas）三倍体，助力牡蛎养殖业发展

研究人员开发用荧光通用引物微卫星多重 PCR 分析三倍体太平洋牡蛎（C. gigas）的方法，检测准确率高。

　　多倍体检测对牡蛎产业至关重要。本研究旨在开发一种方法，通过利用荧光通用引物进行微卫星多重聚合酶链反应（PCR），分析三倍体的多样性，从而验证三倍体太平洋牡蛎（Crassostrea gigas）的倍性。研究人员开发了 4 个信息丰富的多重 PCR 组合，总共包含 12 个位于 C. gigas 基因组中的基因组微卫星，这些微卫星分布在 7 条染色体上，每个位点平均有 14 个等位基因 。每个组合使用标记有特定荧光染料的 M13 (-21) 引物，并且每个位点的正向引物都附加了 M13 (-21) 序列。研究以流式细胞术为参考验证了推断倍性的方法，发现两种方法之间的一致性超过 95%，并证明了该方法推断非整倍体的潜在效用。对来自 8 个群体的 496 个三倍体样本进行基因分型，在单次毛细管电泳中，99.63% 的样本每个位点产生 10 个或更多的等位基因。三倍体的正确判定取决于具有三个独特等位基因片段（MNM）的标记数量。使用一个或多个位点具有三个独特等位基因的半严格标准时，三倍体的检测准确率为 95.26%。使用两个或更多位点具有三个独特等位基因的严格标准时，检测准确率为 98.34%。由于选择性育种导致遗传多样性降低的群体更适合半严格标准，可最大化三倍体检测。而养殖群体更适合用严格标准评估，能有效减少二倍体的误判，提高三倍体检测准确率。本研究开发的标记具有高度多态性，在评估遗传多样性和区分群体方面十分有效，为牡蛎育种中的三倍体检测和分析提供了可靠工具。