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为解决布鲁氏菌病诊断难题，研究人员开发 23S-RT-qPCR 技术，提升诊断准确性，意义重大。
布鲁氏菌病在诊断上存在显著挑战，尤其是在感染的慢性阶段。由于组织中的细菌载量通常较低，传统的聚合酶链式反应（PCR）方法可能无法检测到。而且传统 PCR 技术易发生交叉反应，会产生假阳性或假阴性结果。此外，细菌学和血清学检测在敏感性和特异性方面也存在明显局限，这可能会使准确诊断变得更加复杂。
为应对这些挑战，研究人员开发了一种新型的逆转录定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）检测方法，该方法针对布鲁氏菌属高度丰富且保守的 23S rRNA 基因。23S rRNA 基因因其在布鲁氏菌菌株中的数量和遗传稳定性，被选为最佳分子靶点。基于保守区域（序列 ID：NR_103168.2）设计了引物，以确保其广泛适用性，并通过 BLAST 分析验证了引物的特异性。23S-RT-qPCR 方法的一个关键特点是加入了逆转录步骤，将 RNA 转化为互补 DNA（cDNA），这可能会提高检测的敏感性。
以布鲁氏菌 S2疫苗株为模板，实验结果表明，与传统定量 PCR（qPCR）相比，23S-RT-qPCR 方法使循环阈值（Ct）值降低了约 2 - 3 个单位（14.67 - 16.74）。使用 T 检验进行的统计分析表明，这种降低具有显著性（P＜0.05）。研究人员还使用临床样本进一步评估了 23S-RT-qPCR 方法的性能，并与 IS711 检测方法进行了比较。结果显示，23S-RT-qPCR 方法的假阳性率（2.6%）和假阴性率（7.6%）均低于 IS711 方法，后者的假阳性率为 5.2%，假阴性率为 7.6% 。这些结果表明，23S-RT-qPCR 方法在临床样本分析中具有更高的敏感性和特异性，降低了假阳性和假阴性率。总体而言，该方法可能为慢性布鲁氏菌病的诊断提供更可靠的途径，并且在检测其他细菌病原体方面也可能具有更广泛的应用前景。
