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研究人员建立犬肥大细胞瘤（MCT）细胞系 C18，对比其与其他细胞系特性及对免疫细胞杀伤敏感性，为研究和治疗提供新方向。
犬类肥大细胞瘤（Mast cell tumour，MCT）是一种严重威胁狗狗生命健康的肿瘤，在全球范围内都很常见。它就像隐藏在狗狗身体里的 “定时炸弹”，随时可能引发严重后果。目前，对于患有皮肤 MCT 的狗狗，治疗效果普遍不佳。这主要是因为肿瘤具有很强的侵袭性，而且不同肿瘤的行为表现差异很大，就像每个肿瘤都有自己独特的 “性格” 一样，这使得医生很难制定出统一有效的治疗方案。同时，由于 MCT 的复杂性以及癌症相关死亡的高风险，开发一个有效的模型来研究其发病机制、肿瘤行为和个性化治疗策略极具挑战性。虽然已经有几种犬类 MCT 细胞系被建立和研究，但人们对每个细胞系的了解仍然有限，肿瘤与免疫细胞之间的相互作用也尚未完全明确。
为了攻克这些难题，来自多个机构的研究人员展开了深入研究，其中包括朱拉隆功大学（Chulalongkorn University）等。他们的研究成果发表在《BMC Veterinary Research》上。
研究人员主要采用了以下几种关键技术方法：一是组织外植体培养技术，用于建立犬类 MCT 细胞系；二是逆转录聚合酶链反应（Reverse-Transcription Polymerase Chain Reaction，RT-PCR）技术，用于检测基因表达；三是免疫荧光测定（IFA）和流式细胞术，用于分析细胞表面标记；四是 MassARRAY SNP 基因分型技术，用于鉴定基因多态性。
研究结果如下：
- 细胞系的建立：研究人员收集了 18 个犬类 MCT 病例的样本，尝试建立细胞系。最终，仅从一只患有高级别 MCT 的 13 岁雌性西施犬的样本中成功建立了一个细胞系，命名为 C18 细胞系。在建立过程中发现，细针穿刺（FNA）获得的标本大多无法培养超过两代，而组织外植体培养显著提高了培养成功率，最终使用培养基 3 成功建立了细胞系（成功率为 12.5%）。
- 细胞形态和培养特性：C18 细胞呈圆形至椭圆形，细胞大小在 15 - 20μm 之间，与其他三种参考细胞系（CMMC、VIMC 和 CoMS）相比，细胞尺寸明显更大。在细胞聚集体球状体大小方面，C18 的球状体最小，平均为 108.14 ± 33.52μm ，而 VIMC 最大。C18 细胞的生长稳定，可维持超过 140 代培养。
- 体外生长特性：比较各细胞系的体外倍增时间发现，C18 的倍增时间最长，为 50.30 ± 1.09h（第 10 代）和 48.85 ± 0.86h（第 100 代），之后依次是 VIMC、CMMC 和 CoMS。所有细胞系都有一个初始的停滞期（48 - 72h）和对数生长期（4 - 6 天），随后进入静止期和衰退期。
- 细胞系特征：通过 RT-PCR 检测发现，所有细胞系都表达 c-kit、类胰蛋白酶（tryptase）、FcεRIα 和 FcεRIβ 基因，但 C18 细胞系不表达糜酶（chymase）。免疫荧光染色和流式细胞术分析表明，各细胞系中 c-kit 和 tryptase 的表达存在差异，C18 细胞系中 c-kit 阳性细胞比例为 99.24%，tryptase 阳性细胞比例为 16.09%。
- c-kit 突变检测：研究发现，C18 细胞系在 c-kit 基因的外显子 11 存在突变，表现为异常条带，序列分析显示存在 54 个核苷酸的内部串联重复（Internal Tandem Duplication，ITD），这一突变与犬类 MCT 的发展和恶性程度相关。
- SNP 检测：在犬类 MCT 细胞系中鉴定出 20 个来自 6 个基因的单核苷酸多态性（Single Nucleotide Polymorphisms，SNPs）。其中，SPAM1 基因的 rs851582160T>TC 是所有细胞系共有的 SNP，而其他一些 SNP 则在不同类型（皮肤或黏膜）的 MCT 细胞系中特异性存在。
- PBMCs 对犬类 MCT 细胞系凋亡和活力的影响：当 MCT 细胞系与健康供体的外周血单个核细胞（Peripheral Blood Mononuclear Cells，PBMCs）共培养时，所有细胞系的早期凋亡和总凋亡细胞百分比均显著增加。在四个细胞系中，C18 的早期凋亡和总凋亡细胞百分比最高，并且只有在 C18 细胞系中，共培养条件下的活细胞数量明显低于对照组。
研究结论和讨论部分指出，研究人员成功建立并表征了一种新型的犬类皮肤 MCT 细胞系 C18。C18 细胞系在其特性、生长行为以及与 PBMCs 的相互作用方面展现出独特的性质。该细胞系的建立为深入研究犬类 MCT 的发病机制、肿瘤行为以及开发新的治疗策略提供了重要的工具。C18 细胞系对免疫细胞介导的细胞毒性最为敏感，这为免疫治疗的研究提供了新的方向。不过，由于肿瘤的异质性和患者免疫能力的个体差异，未来还需要进一步开展个体化研究。总的来说，这项研究为犬类 MCT 的研究和治疗开辟了新的道路，具有重要的理论和实践意义。
