黑色素亲和蛋白（MLPH）通过 NONO-SPHK1-S1P 轴抑制三阴性乳腺癌生长和淋巴结转移：潜在治疗新靶点

为探究三阴性乳腺癌（TNBC）淋巴结转移机制，研究人员研究 MLPH 作用，发现其经特定轴抑制肿瘤进展，或为 TNBC 治疗提供新策略。

　　三阴性乳腺癌（Triple negative breast cancer，TNBC），这个隐匿在女性健康领域的 “杀手”，一直让医学界头疼不已。它是乳腺癌中最具侵袭性的亚型，预后极差，由于缺乏有效的靶向治疗手段，TNBC 患者发生转移和复发的风险远高于其他乳腺癌亚型。在乳腺癌的转移过程中，淋巴结转移是最常见的形式，也是病情恶化的重要标志，就像癌细胞伸出的 “邪恶触手”，一点点侵蚀着患者的健康防线。因此，揭示 TNBC 淋巴结转移的潜在机制，寻找新的治疗靶点，成为了医学研究领域亟待攻克的难题。

为了揭开 TNBC 淋巴结转移的神秘面纱，大连理工大学附属肿瘤医院（中国医科大学附属肿瘤医院、辽宁省肿瘤医院 & 研究所）等机构的研究人员踏上了探索之旅。他们的研究成果发表在《Journal of Translational Medicine》上，为 TNBC 的治疗带来了新的曙光。

研究人员采用了多种关键技术方法。他们从多个 TNBC 相关的基因表达综合数据库（Gene Expression Omnibus，GEO）中筛选数据，构建加权基因共表达网络分析（WGCNA），从而确定与 N 分期相关的基因模块。利用 RNA 测序（RNA-seq）技术分析 MLPH 下游靶点，通过蛋白质质谱分析与 MLPH 相互作用的蛋白。还运用免疫沉淀、定量实时荧光定量 PCR（qRT-PCR）、RNA 结合蛋白免疫沉淀（RIP）等实验进行验证。此外，构建动物模型，在体内进一步探究相关机制。同时，研究使用了患者的组织标本，为研究结果提供了临床依据。

研究结果如下：

1. 关键基因 MLPH 的发现：研究人员从两个 TNBC 的 GEO 数据集中提取基因表达信息，经分析确定了与 N 分期相关的黄色模块，并从中筛选出十个关键基因，其中 MLPH 备受关注。通过对多个数据库和临床样本的分析发现，MLPH 在 TNBC 中表达下调，且与淋巴结转移和患者不良预后呈负相关。在 TNBC 细胞系中，MLPH 的表达水平低于其他癌细胞系，而且 TNBC 细胞的侵袭和迁移能力更强，这暗示着 MLPH 的表达可能与乳腺癌细胞的侵袭和迁移有关123。
2. MLPH 对 TNBC 细胞功能的影响：研究人员通过细胞功能实验发现，过表达 MLPH 可显著抑制 TNBC 细胞（如 HS578T 细胞和 MDA-MB-231 细胞）在体外的增殖、侵袭和迁移能力。在 CCK8 实验和集落形成实验中，过表达 MLPH 的细胞增殖速率明显降低；在伤口愈合实验和 Transwell 实验中，细胞的迁移和侵袭能力也受到显著抑制345。
3. MLPH 的作用机制：为探究 MLPH 影响 TNBC 进展的机制，研究人员进行 RNA-seq 分析，发现 MLPH 可下调鞘氨醇激酶 1（Sphingosine kinase 1，SPHK1）的表达。进一步研究表明，MLPH 在 TNBC 细胞中通过与非 POU 结构域含八聚体结合蛋白（Non-POU domain-containing octamer-binding protein，NONO）相互作用，阻止 NONO 与 SPHK1 前体 RNA 结合，进而抑制 SPHK1 的 mRNA 剪接，降低 SPHK1 的表达水平。而 SPHK1 是合成鞘氨醇 - 1 - 磷酸（Sphingosine-1-phosphate，S1P）的关键酶，MLPH 下调 SPHK1 表达后，细胞内和细胞外的 S1P 水平降低6711。
4. S1P 对 TNBC 细胞的影响及体内验证：研究发现，S1P 在 TNBC 组织中的水平高于其他乳腺癌亚型。外源性添加 S1P 可以逆转 MLPH 对 TNBC 细胞增殖、迁移、侵袭和黏附的抑制作用。在动物实验中，过表达 MLPH 的肿瘤细胞在小鼠体内生长缓慢，淋巴结转移率降低，而注射 S1P 可削弱 MLPH 的抑制效果。这表明 MLPH 通过抑制 S1P 合成，抑制了 TNBC 细胞的多种恶性行为，在体内也发挥着抑制肿瘤生长和淋巴结转移的作用8910。

研究结论和讨论部分指出，该研究首次揭示了 MLPH 在 TNBC 中的重要作用及其分子机制。MLPH 通过 NONO-SPHK1-S1P 轴抑制 TNBC 细胞的增殖、侵袭、迁移和黏附，进而抑制肿瘤生长和淋巴结转移。尽管目前针对 S1P 信号通路的治疗药物存在一些问题，如 FTY720 的免疫抑制副作用限制了其在癌症治疗中的应用，但 MLPH 的发现为 TNBC 的治疗提供了新的潜在靶点。未来有望基于这一发现，开发出更有效的 TNBC 治疗策略，为 TNBC 患者带来新的希望。这项研究为 TNBC 的基础研究和临床治疗开辟了新的方向，具有重要的科学意义和临床应用价值。