一种评估抗高尿酸血症候选物促尿酸排泄作用的新策略：以蒌蒿叶咖啡酰奎宁酸提取物为例

研究人员为探究蒌蒿叶提取物（ASTLE）降尿酸机制，经多种实验，发现其有促尿酸排泄作用，提供新评估策略。

　　高尿酸血症，简单来说，就是血液中尿酸水平过高。如今，它在全球的患病率不断攀升，已然成为了一个棘手的公共卫生问题。在中国内地，约 16.4% 的人受其困扰，美国的患病率也达到了 20.1% 。高尿酸血症可不只是让人关节疼痛引发痛风那么简单，它还和慢性肾病、心血管疾病、糖尿病、高血压等多种疾病的发生发展密切相关，被称为继高血压、高血糖、高血脂后的 “第四高”，严重威胁着人们的健康。

目前已知，高尿酸血症主要是因为尿酸生成过多或者排泄不足。超过 90% 的患者属于尿酸排泄不足型，而肾脏在尿酸排泄中起着关键作用，其中尿酸阴离子转运蛋白 1（URAT1）和葡萄糖转运蛋白 9（GLUT9）是尿酸重吸收的关键蛋白，是治疗尿酸排泄不足的重要靶点。在临床上，常用的治疗药物如苯溴马隆、丙磺舒、雷西纳德等，长期使用会有不良反应，限制了它们的应用。所以，从天然产物中开发治疗高尿酸血症的生物活性化合物，成为了当下的研究热点。

此前研究发现，蒌蒿叶提取物（ASTLE）富含咖啡酰奎宁酸（CQAs），能有效降低高尿酸血症小鼠的尿酸水平，但它降低尿酸的具体机制并不清楚，尤其是不确定是否通过促进尿酸排泄来实现，CQAs 是否是发挥促尿酸排泄作用的主要活性成分也有待证实。基于此，华中农业大学的研究人员开展了一系列研究，相关成果发表在《Food, Nutrition and Health》上。

研究人员采用了多种关键技术方法来深入探究。通过建立基于 6 - 羧基荧光素（6-CFL）的非放射性体外评估方法，该方法利用 6-CFL 与尿酸共享膜转运蛋白的特性，以 6-CFL 的摄取情况来间接反映尿酸的摄取；运用分子对接技术，研究 CQAs 与 URAT1 和 GLUT9 的相互作用；借助 qRT-PCR 和 Western blot 技术，检测相关基因和蛋白的表达水平 。

研究结果如下：

1. 6-CFL 摄取模型的建立与验证：研究人员先确定了 6-CFL 在 HK-2 细胞中的摄取动力学参数，得出 198μM 的 6-CFL 孵育 1h 为最佳实验条件。用已知的尿酸重吸收抑制剂苯溴马隆、丙磺舒、雷西纳德对模型进行验证，结果显示这些抑制剂能浓度依赖性地抑制 6-CFL 摄取，且 IC₅₀值与文献报道相符，这表明成功建立了可用于评估化合物抑制尿酸摄取潜力的 6-CFL 摄取模型。
2. ASTLE 和 CQAs 对 6-CFL 摄取的影响：实验发现，ASTLE 在一定浓度范围内对 HK-2 细胞活力无显著影响，且能浓度依赖性地抑制 6-CFL 摄取，IC₅₀值为 533.67±19.91μg/mL。CQAs 混合物也能显著抑制 6-CFL 摄取，且抑制效果与 534μg/mL 的 ASTLE 相当，由此推断 CQAs 是 ASTLE 抑制细胞尿酸摄取的主要成分。进一步研究发现，所有 125μM 的 CQAs 都能显著抑制 6-CFL 摄取，尤其是二咖啡酰奎宁酸（di-CQAs）的抑制作用更强，其中 3,4 - diCQA 效果最佳，IC₅₀值为 51.67±6.60μM 。
3. CQAs 与 URAT1/GLUT9 的相互作用：分子对接结果显示，1,4 - diCQA、3,4 - diCQA 和 4,5 - diCQA 与 URAT1 的亲和力最强，所有 di-CQAs 与 GLUT9 的亲和力都强于单咖啡酰奎宁酸（mono-CQAs）。3,4 - diCQA 与 URAT1 和 GLUT9 形成的关键氢键数量最多。而且，di-CQAs 与尿酸、苯溴马隆、丙磺舒、雷西纳德共享一些关键氢键结合位点，这可能是 di-CQAs 抑制尿酸转运的潜在机制。
4. ASTLE 对尿酸转运蛋白表达的影响：研究发现，高浓度尿酸会使 HK-2 细胞中 URAT1 和 GLUT9 的 mRNA 和蛋白表达升高，ABCG2 的表达降低。而 ASTLE 处理能显著逆转这些变化，表明 ASTLE 可能通过抑制尿酸重吸收、促进尿酸分泌来促进尿酸排泄，这与体内实验结果一致，进一步证实了 ASTLE 的促尿酸排泄作用。

研究结论表明，ASTLE 及其活性成分 CQAs，尤其是 di-CQAs，降尿酸作用部分归因于它们的促尿酸排泄作用，其机制是调节负责尿酸重吸收的 URAT1 和 GLUT9 以及负责尿酸分泌的 ABCG2 的表达。此外，研究证实了 6-CFL 摄取抑制评估、分子对接、qRT-PCR 和 Western blot 分析相结合，是评估和验证抗高尿酸血症候选物促尿酸排泄作用的有效策略。虽然基于 6-CFL 的 HK-2 细胞模型存在一定局限性，只能间接反映药物抑制尿酸重吸收的潜力，但更适合在药物研发早期评估促尿酸排泄潜力，节省成本和时间。这一研究为高尿酸血症的治疗提供了新的思路和方法，也为天然产物在抗高尿酸血症药物开发中的应用提供了重要依据。