新型多病原体捕获多克隆抗体的制备及夹心酶联免疫吸附测定（sELISA）性能研究

为解决食源性病原体检测问题，研究人员制备针对多种菌的捕获抗体，评估 sELISA 性能。

　　夹心酶联免疫吸附测定（sandwich enzyme-linked immunosorbent assay，sELISA）因成本低、操作简单，是鉴定食源性病原体的传统技术。然而，大多数 sELISA 是利用两种特异性抗体检测单一食源性病原体，用于捕获和检测目标细菌。本研究旨在通过 sELISA 制备并表征一种针对产肠毒素大肠杆菌（Enterotoxigenic Escherichia coli，ETEC）、鼠伤寒沙门氏菌（Salmonella Typhimurium）和福氏志贺氏菌（Shigella flexneri，S. flexneri）的通用捕获多克隆抗体。研究人员针对 CsgA、FhuA 和 OmpA 的重组蛋白制备兔多克隆抗体（polyclonal antibodies，pAbs），命名为 anti - mix。这些重组蛋白在大肠杆菌（Escherichia coli，E. coli）、鼠伤寒沙门氏菌和福氏志贺氏菌中保守，但在单核细胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes，L. monocytogenes）和粪肠球菌（Enterococcus faecalis，E. faecalis）中不保守。利用纯化的重组蛋白和表达抗原的细菌全菌培养物，通过间接 ELISA 检测发现，anti - mix 血清效价高于 1:32,000，且无法识别单核细胞增生李斯特菌和粪肠球菌。此外，研究人员纯化了重组蛋白 A，并将其用于在 sELISA 中定向捕获抗体（anti - mix）。不过，在添加或未添加蛋白 A 的情况下，检测加标牛奶样本中 ETEC 时，sELISA 的检测灵敏度并无统计学差异。在磷酸盐缓冲液（Phosphate - buffered saline，PBS）中，sELISA 检测 ETEC 的线性范围为 1×10⁸至 1×10⁴个细胞 /mL，在加标牛奶样本中的线性范围为 1×10⁸至 1×10⁵个细胞 /mL。在加标牛奶样本中，ETEC 的检测限低于在 PBS 中的检测限，这表明与 PBS 相比，被分析的基质（牛奶）存在负面影响。