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研究人员针对透明细胞卵巢癌（CCOC）开展 LINE-1 ORF1p 表达研究，发现其可作早期诊断标志物，意义重大。
透明细胞卵巢癌研究新突破：LINE-1 ORF1p 的关键作用
在生命的微观世界里，癌症就像一群失控的 “捣乱分子”，严重威胁着人类健康。卵巢癌作为女性生殖系统常见的恶性肿瘤之一，其众多亚型中，透明细胞卵巢癌（Clear Cell Ovarian Carcinoma，CCOC）虽然所占比例不算高，仅为 5 - 10%，但却有着独特的 “个性”。它常常与子宫内膜异位症 “纠缠不清”，多数 CCOC 在早期被诊断时，预后相对较好；然而，一旦病情发展到晚期，治疗就变得极为棘手，患者对标准化疗方案反应不佳，预后极差。这背后的原因是什么呢？为了找到答案，解开 CCOC 的发病机制之谜，来自美国宾夕法尼亚大学卵巢癌研究中心、哈佛医学院等多个研究机构的科研人员展开了深入研究。相关研究成果发表在《npj Precision Oncology》上。
科研人员为了探究 CCOC 的发病机制，寻找有效的诊断和治疗靶点，针对 LINE-1 在 CCOC 及相关前体病变中的表达情况展开研究。研究中用到了多种关键技术方法：首先是组织标本和血液标本的采集，组织标本来自医院病理科的存档，血液标本则分别取自大学的相关研究中心和医院；免疫组化（Immunohistochemistry，IHC）技术用于检测组织中 ORF1p 的表达；细胞系实验利用多种细胞系，通过蛋白质免疫印迹（Western blot）等方法研究 ORF1p 的表达和释放；最后，采用单分子阵列（Single Molecule Array，Simoa）检测技术测定患者血液样本中 ORF1p 的含量。
下面来看具体的研究结果：
- LINE-1 在透明细胞卵巢癌中去抑制表达：科研人员制作了 40 例 CCOC 组织芯片（TMA），通过免疫组化评估 ORF1p 表达。结果显示，ORF1p 染色主要集中在上皮细胞，基质部分无染色。在 40 例样本中，33 例（82.5%）呈阳性，表明 LINE-1 在 CCOC 中普遍去抑制表达。而且，对 2 例复发病例的研究发现，ORF1p 在化疗前后均强表达，提示其稳定性可用于复发病例。此外，研究还发现 ORF1p 肿瘤表达与患者年龄、国际妇产科联盟（FIGO）分期、肿瘤大小均无相关性。
- ORF1p 表达在肿瘤转化过程中增强：由于 CCOC 与子宫内膜异位症关系密切，科研人员对典型和非典型子宫内膜异位症进行 ORF1p 免疫组化检测。结果显示，典型子宫内膜异位症样本中，19/62（31%）呈阳性；非典型子宫内膜异位症样本中，28/40（70%）呈阳性；而良性增殖期和分泌期子宫内膜样本大多呈阴性。这表明 ORF1p 表达在肿瘤转化过程中增强。
- CCOC 细胞系表达并释放 LINE-1 ORF1p：研究人员选取多种细胞系进行研究，蛋白质免疫印迹分析显示，CCOC 细胞系中 ORF1p 可被检测到，而子宫内膜细胞系 hEM3 无表达，子宫内膜异位细胞系 12Z 呈弱表达。进一步研究发现，多数 CCOC 细胞系能将 ORF1p 释放到培养基中，且其水平与细胞裂解物中相关。通过对细胞外囊泡（EVs）的研究发现，ORF1p 可存在于 CCOC 细胞系来源的小细胞外囊泡（sEVs）中，这表明 sEVs 是 ORF1p 释放到细胞外的机制之一。
- LINE-1 ORF1p 可在 CCOC 患者血液样本中检测到：科研人员应用两种高灵敏度的 Simoa 检测方法，对 CCOC 患者的血浆和血清样本进行检测。结果显示，两种方法在 5 例血浆样本中均成功检测到 ORF1p，在血清样本检测中，34H7::Nb5-5LL 检测到 7/8 例 I 期 CCOC 病例，62H12::Ab6 检测到所有 I 期病例。这表明 ORF1p 有望成为 CCOC 早期检测的生物标志物。
- CCOC 及前体细胞中 ORF1p 的调控机制：研究表明，DNA 甲基化是调控 ORF1p 表达的主要机制。用 DNA 甲基转移酶（DNMTs）抑制剂地西他滨处理细胞，可降低 LINE-1 甲基化水平，诱导 ORF1p 表达；用特异性 DNMT1 抑制剂 GSK3685032 处理细胞，也能使良性细胞表达 ORF1p。此外，研究还发现 ARID1A 突变、TP53 突变与 ORF1p 表达均无明显相关性。
研究结论表明，LINE-1 元件的去抑制是 CCOC 发生的早期事件，ORF1p 可作为 CCOC 的诊断生物标志物。这一研究成果为 CCOC 的早期诊断和治疗提供了新的方向和潜在靶点。不过，LINE-1 在卵巢癌发生中的具体功能、其去抑制的复杂调控机制仍有待进一步研究。但此次研究无疑为攻克 CCOC 这一难题迈出了重要一步，期待未来基于这些发现，能开发出更有效的诊断和治疗方法，为患者带来新的希望。
