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为明确 TLS 对非小细胞肺癌（NSCLC）患者的影响，研究人员开展相关研究，发现其与免疫、生存相关，有潜在诊断价值。
在癌症的免疫 “战场” 上，免疫细胞与肿瘤细胞的 “交锋” 时刻影响着战局走向。免疫检查点抑制剂已成为多种癌症治疗的 “利器”，能让部分晚期癌症患者长期生存，这背后是肿瘤免疫环境在发挥作用。在非小细胞肺癌（NSCLC）领域，免疫细胞的数量和种类与患者生存息息相关，比如高密度的浸润 T 淋巴细胞和 B 淋巴细胞、血浆细胞与患者长期生存有关，而抑制性免疫细胞过多则预后不佳。
三级淋巴结构（Tertiary lymphoid structures，TLS）作为肿瘤免疫环境中的特殊存在，是淋巴细胞聚集形成的类似二级淋巴器官的结构，在癌症免疫中占据重要地位。它由多种免疫细胞组成，包括 B 细胞、T 细胞、浆细胞等，还含有高内皮微静脉 。已有研究表明，TLS 的存在与 NSCLC 患者的良好预后相关，甚至能预测免疫治疗的效果。然而，以往研究存在样本量小、检测方法多样且缺乏统一标准、对 TLS 与肿瘤免疫环境整体关系研究不足等问题。为了更全面深入地了解 TLS 在 NSCLC 中的作用，来自瑞典乌普萨拉大学等机构的研究人员开展了相关研究，研究成果发表在《Cellular Oncology》杂志上。
研究人员用到了以下几种主要关键技术方法：
- 样本队列：研究对象为 680 例 NSCLC 患者，均来自乌普萨拉大学医院，分为两个队列，随访时间不同，接受新辅助化疗的患者被排除12。
- 组织病理学评估：选取 H&E 染色的肿瘤切片，扫描后由两位病理学家独立评估 TLS 的分布和数量，根据是否有生发中心区分成熟和未成熟 TLS34。
- 基因突变检测：对部分患者进行基因检测，包括 EGFR、TP53、KRAS 等基因突变检测及肿瘤突变负荷（Tumor mutational burden，TMB）评估5。
- 免疫细胞浸润量化：通过组织微阵列（Tissue microarrays，TMAs）对 271 例患者的免疫细胞浸润情况进行量化6。
研究结果如下：
- TLS 的普遍存在与分布差异：在可评估的 536 例病例中，86% 的肿瘤存在 TLS，平均每个病例有 8 个 TLS，其中 24% 为成熟 TLS。TLS 在鳞状细胞癌中更为丰富，且外周 TLS 在吸烟者和腺癌亚组中数量更多7。
- TLS 与突变背景的关系：虽然 KRAS 和 STK11 突变的肿瘤总体 TLS 数量较少，但调整多重检验后，只有 KRAS 突变与 TLS 的负相关仍显著，且该关系可能受组织学影响。高 TMB 的病例外周 TLS 数量较多，但与肿瘤内 TLS 无关联8。
- TLS 与患者生存的关联：TLS 的存在与患者更长的总生存期相关，这种关联主要由肿瘤外周 TLS 驱动，在腺癌亚组中更为明显。成熟 TLS 对生存的影响在鳞状细胞癌队列中显著，在腺癌亚组中不显著。多变量 Cox 回归模型显示，TLS 的预后影响独立于其他临床参数910。
- TLS 与免疫细胞浸润的关系：肿瘤外周 TLS 数量与多种免疫细胞浸润相关，包括 CD4?、CD8?、CD20?、FOXP3?、CD138?和 PD-L1?细胞等。肿瘤内 TLS 与较少的 CD163?细胞（M2 样巨噬细胞）相关11。
研究结论和讨论部分指出，该研究在大规模 NSCLC 患者队列中明确了 TLS 的空间分布特征，证实其数量与患者生存的有利关联，且这种关联与 TLS 位置和肿瘤亚型有关。TLS 与免疫细胞浸润相关，反映了其在肿瘤免疫中的重要作用。虽然研究存在一些局限性，如临界值优化、多重检验、观察者间一致性中等问题，但研究结果仍凸显了 H&E 切片上常规 TLS 评估的诊断潜力。未来，更严格的统计方法、功能研究以及数字病理学的发展有望进一步揭示 TLS 的奥秘，为 NSCLC 患者的诊断和治疗提供更有力的支持。
