钩吻总生物碱（TAG）抗肝癌机制新发现：靶向 CXCL13 基因

为评估 TAG 体内外抗肝癌（HCC）活性，研究人员开展相关研究，发现其可抑制 HCC，与调节 CXCL13 基因有关。

　　摘要：目的：评估钩吻总生物碱（total alkaloids from Gelsemium elegans Benth., TAG）在体内和体外的抗肝癌（hepatocellular carcinoma, HCC）活性，并通过转录组分析阐明其潜在的作用机制。方法：进行 TAG 提取，采用高效液相色谱法（high-performance liquid chromatography, HPLC）对主要成分进行定量分析。评估 TAG（100、150 和 200 μg/mL）对多种肿瘤细胞，包括 SMMC-7721、HepG2、H22、CAL27、MCF7、HT29 和 HCT116 的影响。通过集落形成实验和细胞染色检测 TAG 对 HCC 细胞增殖和凋亡的影响。采用蛋白质免疫印迹法（Western blotting）检测半胱天冬酶 - 3（Caspase-3）、B 细胞淋巴瘤 - 2（Bcl-2）和 Bcl-2 相关 X 蛋白（Bax）的蛋白水平。在体内，利用 H22 细胞构建肿瘤异种移植模型。将 40 只昆明小鼠随机分为模型组、环磷酰胺（20 mg/kg）组、TAG 低剂量（TAG-L, 0.5 mg/kg）组和 TAG 高剂量（TAG-H, 1 mg/kg）组，每组 10 只。在 14 天的治疗过程中记录并比较肿瘤体积、体重和肿瘤重量，计算免疫器官指数。通过苏木精 - 伊红染色（hematoxylin and eosin staining）和免疫组织化学观察组织变化。此外，进行转录组和代谢组分析以及实时荧光定量聚合酶链式反应（quatitative real-time polymerase chain reaction, RT-qPCR），以检测 mRNA 和代谢物的表达。结果：HPLC 成功鉴定了 TAG 提取物的成分。活细胞成像分析和细胞活力检测表明，TAG 可抑制 SMMC-7721、HepG2、H22、CAL27、MCF7、HT29 和 HCT116 细胞的增殖。集落形成实验、Hoechst 33258 染色、罗丹明 123 染色和 Western blotting 结果显示，TAG 不仅抑制 HCC 细胞增殖，还促进细胞凋亡（P<0.05）。体内实验表明，TAG 可抑制小鼠 HCC 实体瘤的生长（P<0.05）。转录组分析和 RT-qPCR 表明，TAG 对 HCC 的抑制作用与关键基因 CXCL13 的调节有关。结论：TAG 在体内外均能抑制 HCC，其抑制作用与关键基因 CXCL13 的调节有关。