揭秘原发性肺淋巴上皮瘤样癌：AKT3和 FGFR2成为潜在治疗新靶点

研究人员针对原发性肺淋巴上皮瘤样癌（PPLELC）治疗难题，开展单细胞分析，发现 AKT3和 FGFR2可作治疗靶点和预后标志物，意义重大。

　　原发性肺淋巴上皮瘤样癌（PPLELC），这是一种极为罕见的非小细胞肺癌亚型，如同隐藏在肺部健康角落里的 “神秘杀手”。它与爱泼斯坦 - 巴尔病毒（EBV）感染密切相关，虽然在所有肺癌病例中仅占 1%，但近年来随着诊断技术的进步，其在非小细胞肺癌中的检出率逐渐上升。PPLELC 有着独特的 “个性”，偏好找上年轻的非吸烟者，而且肿瘤组织中常常有大量淋巴细胞浸润。然而，它也带来了诸多棘手的问题。常见的驱动基因突变，如表皮生长因子受体（EGFR）突变，在 PPLELC 中极为罕见，这使得患者难以从现有的靶向治疗中获益。目前，PPLELC 的一线治疗策略主要是手术和化疗，但术后化疗对患者生存时间的改善极为有限，部分患者接受免疫治疗甚至出现了病情的加速进展。因此，寻找个性化的治疗靶点，成为了改善 PPLELC 患者临床结局的关键所在，也正是基于此，中山大学孙逸仙纪念医院的研究人员开展了这项意义重大的研究。

研究成果发表在《Communications Biology》上，为 PPLELC 的治疗开辟了新的方向。研究人员运用了多种关键技术方法。在样本处理与测序方面，收集 2019 - 2022 年经病理确诊并手术的 PPLELC 患者组织标本，通过机械解离等操作制备单细胞 RNA 文库，进行单细胞转录组测序（snRNA - seq），同时对肿瘤组织进行全外显子测序（WES） 。在数据分析上，运用多种生物信息学工具对测序数据进行处理、分析和整合。此外，构建患者来源的异种移植（PDX）模型，用于评估药物疗效。

研究结果主要包含以下几个方面：

1. 单细胞转录组分析：对 4 例患者的 PPLELC 样本进行 snRNA - seq，并整合公开数据集，最终获得 50007 个细胞用于后续分析。研究鉴定出 6 种主要细胞类型，发现肿瘤组织中 T 细胞和 B 细胞比例显著增加，髓细胞比例明显降低，且 PPLELC 患者浸润免疫细胞比鼻咽癌（NPC）和非小细胞肺癌（NSCLC）患者更具异质性。
2. 关键细胞亚群与预后关系：通过对上皮细胞进行无监督聚类分析，发现 PPLELC Cluster 6 在所有肿瘤样本中均存在，且该亚群细胞的拷贝数变异（CNV）负担最大。基因富集分析显示，该亚群与病毒致癌和先天免疫相关基因及通路有关。其中，AKT₃和 FGFR₂基因表达显著上调，免疫组化染色也证实了这一点。进一步研究发现，AKT₃和 FGFR₂高表达与患者总生存期（OS）和无进展生存期（PFS）较差相关，且与肿瘤的晚期 TNM 分期、较大肿瘤尺寸和淋巴结转移相关。
3. 靶向治疗验证：构建 PPLELC 患者来源的 PDX 模型，分别用 AKT₃抑制剂（Enzastaurin）和 FGFR₂抑制剂（Erdafitinib）进行体内治疗实验。结果显示，两种抑制剂都能显著抑制肿瘤生长，使肿瘤体积和重量明显减小，且对 PDX 模型的体重无明显影响。同时，免疫组化和蛋白质免疫印迹分析表明，抑制剂可抑制靶向分子及其下游蛋白的磷酸化，但不影响 AKT₃和 FGFR₂的表达。
4. 免疫细胞分析：对 T 细胞、B 细胞和髓系细胞进行聚类和状态分析，发现不同免疫细胞亚群在 PPLELC 肿瘤微环境中具有不同的功能状态和作用。如细胞毒性 CD8⁺ T 细胞具有较高的细胞毒性，而耗竭的 CD8⁺ T 细胞具有较高的耗竭评分和细胞毒性。B 细胞主要分为浆细胞、滤泡 B 细胞和生发中心 B 细胞，其中浆细胞在炎症通路中显著下调。肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）分为三个亚群，各亚群在抗原呈递、免疫抑制和血管生成等方面具有不同的功能。
5. 细胞间通讯网络分析：利用 Cellchat 分析发现，TAM 亚群与其他细胞类型的配体 - 受体相互作用最多，肿瘤细胞在肿瘤微环境中起关键作用。恶性细胞与多种免疫细胞通过多种配体 - 受体相互作用相关，且特定信号通路在肿瘤细胞与免疫细胞的通讯中起重要作用。

研究结论表明，AKT₃和 FGFR₂可作为 PPLELC 潜在的治疗靶点和预后生物标志物，为开发合理的靶向治疗和免疫治疗策略提供了有价值的见解。不过研究也存在一些局限性，如样本获取困难限制了进一步的细胞机制和功能实验，患者队列仅来自中国人群影响研究结果的普遍性，AKT₃和 FGFR₂作为预后生物标志物的有效性还需在独立队列中确认，长期使用抑制剂可能导致耐药等问题。尽管如此，这项研究依然为 PPLELC 的治疗带来了新的曙光，为后续研究指明了方向，有望推动 PPLELC 治疗领域的进一步发展，为众多患者带来新的希望。