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为探究香菇多糖（LNT）对神经母细胞瘤（NB）的作用，研究发现 LNT 可抑制肿瘤进展，为治疗提供新方向。
在儿童肿瘤的 “战场” 上，神经母细胞瘤（Neuroblastoma，NB）是一个极为棘手的 “敌人”。它是常见的儿童恶性实体肿瘤，具有生长迅速、易早期转移的特点，无情地夺走了 10 - 15% 儿童因恶性肿瘤导致的生命 。当前针对 NB 的治疗手段，如化疗、手术、放疗和免疫治疗，虽已应用于临床，但由于肿瘤对常规治疗存在抵抗，患者预后依旧不佳，因此寻找新的治疗靶点和有效药物迫在眉睫。
香菇多糖（Lentinan，LNT）作为从香菇中提取的活性成分，有着抗氧化、免疫调节、抗肿瘤等多种功能，已在中国用于辅助肿瘤治疗。然而，它在 NB 治疗方面的效果和具体机制却一直是个谜。为了揭开这个谜底，广州医科大学附属广州市妇女儿童医疗中心儿科研究所的研究人员开展了深入研究，相关成果发表在《Cell Death Discovery》杂志上。
研究人员为了探究 LNT 对 NB 的作用，采用了多种关键技术方法。细胞实验方面，培养了 SK - N - SH 和 SY5Y 两种 NB 细胞系，用不同剂量 LNT 处理后，运用 CCK - 8 检测细胞活力、流式细胞术分析细胞周期和凋亡情况、Transwell 实验评估细胞迁移和侵袭能力。在动物实验中，构建荷瘤小鼠模型，给予不同剂量 LNT 处理，监测肿瘤生长情况并进行免疫组化检测。此外，还利用了 RT - qPCR、Western blot 检测基因和蛋白表达水平，通过免疫共沉淀（co - IP）、染色质免疫沉淀（ChIP）等实验探究蛋白间相互作用和转录调控机制。
研究结果如下：
- LNT 抑制 NB 体内生长：构建荷瘤小鼠模型，注射 PBS 或 LNT 进行体内研究。结果显示，LNT 处理组肿瘤体积更小、生长速度更慢、重量更轻，且肿瘤组织中增殖标记物（ki67）表达显著下调，证实 LNT 在 NB 中具有抑瘤功效。
- LNT 抑制 NB 细胞生长、迁移和侵袭：在体外实验中，用不同剂量 LNT 处理 NB 细胞，CCK - 8 检测发现细胞活力随 LNT 剂量增加而逐渐降低；细胞周期监测表明 LNT 使细胞周期停滞在 G0/G1期；流式细胞术检测显示细胞凋亡率明显上升；Transwell 实验证明细胞迁移和侵袭能力逐渐减弱。
- LNT 下调 FOS 表达：FOS 基因在 NB 中是致癌基因，研究发现 LNT 处理后，NB 细胞中 FOS 的 RNA 和蛋白水平均显著降低，且荷瘤小鼠中高剂量 LNT 处理组肿瘤组织的 FOS 表达下降更明显。
- 沉默 FOS 抑制 NB 细胞生长等能力：通过转染特异性 shRNAs 沉默 FOS 表达，CCK - 8 检测发现 NB 细胞活力显著降低，细胞周期停滞在 G0/G1期，细胞凋亡加速，迁移和侵袭能力下降。敲除 FOS 基因进一步验证了其促进 NB 细胞增殖等作用。
- FOS 过表达恢复 NB 细胞功能：过表达 FOS 后，CCK - 8 检测显示 NB 细胞活力增强，流式细胞术证明其能逆转 LNT 诱导的细胞周期阻滞，Transwell 实验表明细胞迁移和侵袭能力恢复，细胞凋亡加速情况得到逆转，证实 LNT 通过下调 FOS 抑制 NB 进展。
- FOS 与 JUND 相互作用上调 VRK1：研究发现 FOS 与 p53 无直接相互作用，但 FOS 敲低后 p53 蛋白水平上升。进一步研究发现 FOS 与 VRK1 有关，FOS 敲低使 VRK1 的 mRNA 和蛋白水平降低。通过生物信息学分析和实验验证，发现 FOS 可与 JUND 相互作用，且 JUND 是 VRK1 的潜在转录调节因子。
- FOS 通过 JUND 转录激活 VRK1：RT - qPCR 分析显示 JUND 过表达能增强 VRK1 表达，ChIP 实验表明 JUND 与 VRK1 启动子有强亲和力，荧光素酶报告基因实验证实 JUND 过表达可增强 VRK1 启动子活性，且 FOS 和 JUND 共过表达时效果更显著，揭示 FOS 通过 JUND 激活 VRK1 转录。
- VRK1 通过磷酸化调节下调 p53：GST - pulldown 实验和质谱分析表明 VRK1 可直接与 p53 蛋白的 291 - 393 位点相互作用并诱导其磷酸化。VRK1 敲低使 p53 蛋白水平上升、磷酸化水平下降，突变 p53 的磷酸化位点 S1 后，VRK1 与 p53 的相互作用减弱，且 VRK1 促进 p53 磷酸化并抑制其泛素化。
研究结论和讨论部分指出，该研究揭示了 LNT 在 NB 中的抗肿瘤功效及下游分子机制。LNT 可下调 FOS，FOS 与 JUND 相互作用转录激活 VRK1，LNT 通过下调 VRK1 抑制 p53 磷酸化，增强 p53 蛋白稳定性。这一发现为 NB 患者寻找新的治疗靶点和有效药物提供了重要依据。不过，该研究也存在一定局限性，后续研究可进一步探索 LNT 在 NB 进展中的更多潜在机制，以及不同分子量和质量的 LNT 对治疗效果和机制的影响 。
