Let-7a microRNA：破解黑色素瘤联合治疗耐药难题的关键 “钥匙”

黑色素瘤治疗面临耐药困境，为探索克服之法，研究人员开展对达拉非尼（DAB）和曲美替尼（TM）联合治疗耐药黑色素瘤细胞机制的研究。结果发现二者联合可诱导细胞凋亡，Let-7a 调控凋亡敏感性。这为克服黑色素瘤耐药提供新思路。

　　恶性黑色素瘤是一种极具侵袭性的肿瘤，对于晚期转移患者而言，治疗难度极大，平均预期寿命仅 6 - 10 个月。近年来，靶向药物虽显著提高了黑色素瘤患者的生存率，但 BRAF 抑制剂治疗仍面临诸多挑战，如剂量相关毒性、内在及获得性耐药等问题。同时，化疗耐药也严重阻碍了治疗效果。为了克服这些难题，探寻更有效的治疗策略，来自土耳其伊兹密特佩奇克教育与研究医院（University of Health Sciences, Izmir Tepecik Education and Research Hospital）和塞拉莱巴亚尔大学（Celal Bayar University）的研究人员 Murat Keser 和 Harika Atmaca 开展了相关研究，该研究成果发表于《Irish Journal of Medical Science (1971 -)》。

研究人员采用了多种关键技术方法：通过 MTT 检测细胞活力，结合 CalcuSyn 软件计算联合指数（CI）评估药物联合作用；利用 DNA 片段化 ELISA 分析细胞凋亡；运用脂质转染法实现 Let-7a microRNA 的异位表达和抑制；借助 qRT-PCR 对基因表达水平进行定量；通过 Western blot 测定蛋白质表达 。

研究结果如下：

1. 联合用药抑制细胞活力：研究人员计算出 DAB 和 TM 在 A375 和 RPMI 7951 黑色素瘤细胞中的半数抑制浓度（IC₅₀），发现 72 小时时二者联合具有协同 / 强效协同的细胞毒性。其中，0.7 μM DAB 和 5.0 μM TM 组合效果最强，在 A375 和 RPMI 7951 细胞中，该组合使细胞活力下降幅度远超单药处理12。
2. 诱导细胞凋亡：DNA 片段化分析显示，DAB 和 TM 单独使用可浓度依赖性诱导细胞 DNA 片段化，二者联合诱导作用更强。实验表明，该联合处理主要激活了线粒体介导的凋亡途径，使抗凋亡蛋白 Bcl-2 水平下降，促凋亡蛋白 Bax、caspase-9 和 caspase-3 水平上升34。
3. 影响相关蛋白表达：Western blot 分析表明，联合处理使 A375 和 RPMI 7951 细胞中 pERK1/2 水平下降，MITF 水平上升。这说明联合治疗抑制了 ERK1/2 信号通路，诱导 MITF 表达5。
4. Let-7a 调节细胞凋亡：研究发现 Let-7a 在联合治疗诱导的细胞凋亡中发挥重要作用。异位表达 Let-7a 可减少联合治疗诱导的 DNA 片段化，敲低 Let-7a 则会增加 caspase-3 水平和凋亡细胞数量，且这种增强作用可被 caspase-3 抑制剂抵消6。

研究结论与讨论部分指出，BRAF 和 MEK 抑制剂联合治疗已成为晚期 BRAF 突变黑色素瘤的标准治疗方案，但毒性和耐药问题依旧突出。本研究揭示了 DAB 和 TM 联合治疗耐药黑色素瘤细胞的协同作用机制，证实 Let-7a 通过靶向 caspase-3，对黑色素瘤细胞联合治疗诱导的凋亡敏感性起关键调节作用。不过，该研究存在一定局限性，如仅基于体外实验，缺乏体内验证，且联合治疗诱导线粒体介导凋亡途径的上游调节因子和其他信号级联尚未明确。尽管如此，该研究为理解 Let-7a 在黑色素瘤细胞凋亡中的作用机制奠定了基础，凸显了 Let-7a 作为克服黑色素瘤耐药潜在治疗靶点的重要价值，为后续研究和临床治疗提供了新的方向和思路。