狂犬病病毒RNA聚合酶L蛋白C端结构域的功能解析：NPYNE序列在P蛋白结合与病毒复制中的关键作用

本文深入解析了狂犬病病毒（RABV）L蛋白C端结构域（CTD）中NPYNE序列（L1929-1933）通过形成首个α-螺旋（CTD α1）调控P蛋白结合、RNA依赖的RNA聚合酶（RdRp）功能及L蛋白稳定性的分子机制。通过构建APYAA突变病毒株及回复突变体，首次证实Asn1929对L-P互作和RdRp活性的双重必要性，揭示Glu1933和Asn1932分别特异性参与P蛋白结合与催化功能。该研究为靶向L-P互作的抗病毒药物设计提供了新靶点。

　　狂犬病病毒（RABV）作为致死性神经疾病病原体，其RNA依赖的RNA聚合酶（RdRp）由大蛋白（L）与辅助因子磷蛋白（P）构成，是抗病毒治疗的重要靶标。研究聚焦L蛋白C端结构域（CTD）中高度保守的NPYNE序列（L_1929-1933），该序列位于CTD首个α-螺旋（α1）的N端，虽不直接接触P蛋白，却对L-P互作具有关键调控作用。

通过反向遗传学构建的APYAA突变病毒（RABV-APYAA）表现出复制能力与毒力显著降低，证实NPYNE序列对病毒生存的重要性。回复突变体（RABV-APYAA^rev）分析发现，L₁₉₂₉的Ala→Ser突变可补偿APYAA导致的RdRp功能缺陷。微型基因组与免疫共沉淀实验揭示：Asn₁₉₂₉通过稳定α1螺旋结构，同时维持P蛋白结合与RdRp活性；Glu₁₉₃₃特异性参与L-P互作，而Asn₁₉₃₂独立调控催化功能。

结构生物学证据显示，CTD α1虽非P蛋白直接结合界面，但可能通过诱导L蛋白构象重排（如MT-CTD连接区稳定化）间接增强互作。环己酰亚胺追踪实验首次证实RABV P蛋白通过结合L蛋白延长其半衰期，且该过程依赖NPYNE序列完整性。

研究创新性提出"L-P互作是RdRp功能的必要非充分条件"——L-APYAE突变体保留P蛋白结合能力但丧失催化活性，表明二者存在结构需求差异。该发现为理解单股负链病毒L蛋白的变构调控机制提供了新视角，其鉴定的CTD α1功能热点（如Asn₁₉₂₉螺旋封端）为开发干扰L-P互作的小分子抑制剂奠定了理论基础。