口腔微生物探秘：重度牙周炎患者口腔中艰难梭菌（C. difficile）的 “隐秘角落”

来自里约热内卢联邦大学的研究人员为探究C. difficile在牙周炎患者口腔的分布，检测相关基因，发现其特定基因高频存在。

　　艰难梭菌（Clostridioides difficile，CDI）感染是医疗相关感染的主要原因之一，有着较高的发病率和死亡率。抗生素的使用是引发 CDI 的主要风险因素，此外，年龄增长、存在合并症和免疫抑制也与之相关。C. difficile是一种专性厌氧的革兰氏阳性杆菌，大约 4%-15% 的健康成年人肠道菌群中存在这种细菌。它能形成芽孢，对抗菌物质和恶劣环境具有极强的抵抗力，这有利于其在医疗机构中传播。一旦被摄入，这些极具抵抗力的芽孢会进入肠道黏膜，在胆汁盐和氨基酸等环境因素的刺激下萌发。不过，正常菌群和免疫系统的防御机制会阻碍其定植。C. difficile的主要毒力因子包括毒素 A（TcdA）、毒素 B（TcdB）以及一种名为艰难梭菌转移酶（C. difficile transferase，CDT）的二元毒素。在广谱抗生素导致的肠道菌群失调情况下，C. difficile会不受控制地定植和增殖，进而产生毒素、形成生物膜并进行芽孢形成，最终破坏肠道黏膜，引发疾病。

口腔是C. difficile进入下消化道的主要通道。口腔生态系统复杂，为多种微生物提供了栖息之所，这些微生物常存在于多物种生物膜中。牙菌斑的菌群失调是人类主要口腔疾病 —— 龋齿和牙周病的主要病因。牙周炎是一种具有破坏性的炎症性疾病，其特征是支持牙齿的牙周附着和牙槽骨丧失。牙周病变部位滋生着丰富的多物种生物膜，主要由革兰氏阴性厌氧菌构成。有证据表明，与牙周炎相关的生物膜还可能含有许多具有医学意义的病原体，包括耐多药肠球菌、葡萄球菌、幽门螺杆菌（Helicobacter pylori ）以及假单胞菌目（Pseudomonadales ）和肠杆菌目（Enterobacterales ）的一些菌种。在这种情况下，厌氧的、失调的龈下生物膜也可能为C. difficile的定植提供了一个 “小天地”。C. difficile被重新归类到消化链球菌科（Peptostreptococcaceae ），该科的分类群在牙周病患者的龈下微生物群中含量很高。可以想象，C. difficile的营养细胞和 / 或芽孢在龈下生物膜中的持续存在，可能会降低使用抗菌药物治疗 CDI 的效果，使牙周病变成为通过唾液进行口 - 粪再感染的潜在来源。在以往的研究中，研究人员通过使用全基因组 DNA 探针和棋盘法，在晚期牙周炎的生物膜中发现了C. difficile。然而，使用这种方法可能会与密切相关的物种发生交叉反应。在当前的研究中，研究人员使用针对C. difficile基因的特异性多重聚合酶链式反应（PCR），对来自不同牙周状况的全身健康个体的大量口腔和粪便样本进行筛查。研究人员旨在寻找这些特定基因的存在与牙周病严重程度之间的相关性。

这项回顾性观察单中心研究使用了里约热内卢联邦大学（UFRJ）口腔微生物学实验室生物样本库中的纯化 DNA 样本。生物样本库中（-80°C 保存）的 DNA 来自 2010 年至 2024 年在牙科学院（UFRJ）就诊的 18 岁及以上个体的唾液、牙菌斑和粪便标本。排除标准包括：牙齿数量少于 18 颗；存在慢性炎症性全身性疾病；使用......

本研究招募了 659 名患者，但并非所有人都提供了三种生物样本。如表 S2 所示，与其他临床组相比，牙周炎组中老年人、男性、吸烟者或 former smokers、低收入者和非洲裔个体的比例更高（p < 0.01；卡方检验）。不出所料，这些人表现出更严重的牙周炎症、组织破坏以及更差的口腔......

研究发现，失调的与牙周炎相关的生物膜能够支持一些通常不被认为是口腔微生物群成员的细菌病原体生长，其中就包括几种肠道病原体。在这项研究中，研究人员通过对物种特异性基因的分子检测，探究了肠道病原体C. difficile在牙周病患者口腔微生物群中的出现频率。研究发现，C. difficile的tpi和tcdB 基因在牙周炎患者中的流行率显著更高。

伊莎贝拉?莱特?德奥利维拉?罗莎（Isabela Leite de Oliveira Rosa）：撰写 - 审阅与编辑、撰写 - 初稿、验证、方法学、调查、数据整理。埃莉安?德奥利维拉?费雷拉（Eliane de Oliveira Ferreira）：撰写 - 审阅与编辑、撰写 - 初稿、可视化、监督、方法学、调查。安娜?保拉?维埃拉?科伦坡（Ana Paula Vieira Colombo）：撰写 - 审阅与编辑、撰写 - 初稿、可视化、验证、监督、资源、项目管理、方法学、调查、资金获取、形式......

部分支持本研究结果的数据可在合理请求下从相应作者处获得。

本研究部分得到了巴西国家科学技术发展委员会（CNPq，#301618/2022 - 4）和里约热内卢州研究资助基金会（FAPERJ，#E - 26/200.923/2022；E - 26/211.330/2021）的支持。

作者声明不存在已知的可能影响本文所报道工作的竞争性财务利益或个人关系。

作者感谢研究生在生物样本收集方面的合作；感谢塔莉塔?戈麦斯?B?洛伦索（Talita Gomes B. Louren?o）和安德雷萨?多?罗萨里奥（Andressa do Rosário）在实验室操作方面提供的帮助。