编辑推荐：
前列腺癌抗雄激素治疗耐药问题严峻，研究人员聚焦 miR-454 与 MED12 对雄激素受体（AR）通路的调控作用展开研究。结果发现 miR-454-3p 靶向 AR 和 AR-V7，MED12 敲低影响相关蛋白表达，二者为前列腺癌治疗提供潜在新靶点。
在全球范围内，前列腺癌（PCa）严重威胁着老年男性的健康，每年新增病例超 146 万。早期局限性 PCa 可通过手术或放疗治愈，但病情一旦发展到激素难治或去势抵抗阶段（CRPC），治疗便困难重重，患者死亡率居高不下。这主要是因为癌细胞对雄激素受体（AR）信号通路产生了依赖，并且出现了多种耐药机制，比如基因扩增、AR 基因突变以及 AR 剪接变体的产生等 ，其中 AR 变体 7（AR-V7）与治疗耐药密切相关。因此，寻找治疗 CRPC 的新方法迫在眉睫。
为了攻克这一难题，来自德国埃尔朗根 - 纽伦堡弗里德里希 - 亚历山大大学附属医院泌尿外科和儿科泌尿外科、综合癌症中心等多个研究机构的研究人员开展了深入研究。他们的研究成果发表在《Scientific Reports》上，为前列腺癌的治疗带来了新的希望。
研究人员采用了多种关键技术方法。首先，利用细胞系实验，选用了恩杂鲁胺耐药的 PCa 细胞系 LNCaP Abl EnzR 和 DuCaP EnzR，以及用于对照的 HEK-293T 细胞系 。其次，运用转染技术，将 miRNA 和 siRNA 转染到细胞中，以调控相关基因的表达。此外，还通过蛋白质免疫印迹（Western blot）分析来检测蛋白质表达水平，使用荧光素酶报告基因实验验证 miR-454-3p 的靶基因 。
下面来看具体的研究结果：
- 荧光素酶实验揭示 miR-454-3p 的靶基因：通过将含有 AR 和 AR-V7 的 3’非翻译区（UTR）的荧光素酶报告质粒与 miR-454-3p 表达质粒共转染到 HEK-293T 细胞中，研究发现 AR_1 和 AR-V7_2 的 3’UTR 构建体能够显著抑制报告基因的活性，证实了 AR 和 AR-V7 是 miR-454-3p 的靶基因。
- 恩杂鲁胺耐药细胞系的耐药特征：对 LNCaP Abl EnzR 和 DuCaP EnzR 细胞系进行恩杂鲁胺不同浓度处理，通过 WST 实验检测细胞活力，发现 LNCaP Abl EnzR 细胞系对恩杂鲁胺更敏感，其半数有效剂量（ED50）为 32.4μM，而 DuCaP EnzR 细胞系的 ED50为 60.8μM。
- siMED12、miR-454-3p 及其组合对蛋白表达的影响：研究人员利用蛋白质免疫印迹分析发现，siMED12 能有效降低 MED12 蛋白表达，miR-454 对 MED12 蛋白表达无影响，但二者联合使用可进一步降低 MED12 蛋白水平。同时，siMED12 和 miR-454 均能降低 AR 蛋白表达，联合处理在 DuCaP EnzR 细胞系中效果更显著。此外，AR-V7 仅在 DuCaP EnzR 细胞系中表达，且经各种处理后其蛋白表达均降低。c-Myc 蛋白水平在两种细胞系中也都因处理而降低，在 DuCaP EnzR 细胞系中，siMED12 和 miR-454 联合处理对 c-Myc 蛋白降低有协同作用。
- miR-454-3p、siMED12 及其组合对细胞活力的影响：实验结果显示，siMED12 转染显著降低了两种细胞系的活力，且在恩杂鲁胺浓度越高时，这种降低作用越明显。而 miR-454-3p 转染不仅未降低细胞活力，反而使细胞活力显著增加。二者联合处理时，在 LNCaP Abl EnzR 细胞系中细胞活力增加，在 DuCaP EnzR 细胞系中细胞活力降低 。
综合上述研究结果，研究人员在讨论部分指出，他们首次发现 miR-454-3p 靶向 AR 和 AR-V7，这有助于阐明 miR-454-3p 在 PCa 中的作用。同时，MED12 敲低对降低相关蛋白表达效果显著，是 PCa 潜在的治疗靶点，但还需进一步研究其治疗潜力。此外，miR-454-3p 在 PCa 中既能降低 AR、AR-V7 和 c-Myc 蛋白表达，又能增加细胞活力，其功能具有两面性，可根据靶基因发挥癌基因或抑癌基因的作用。
这项研究为前列腺癌的治疗提供了新的靶点和理论依据，有望推动前列腺癌治疗领域的发展，为 CRPC 患者带来新的治疗方案和希望。
