溶血、脂血和胆红素对生物样本库质量的影响及其在细胞外囊泡(EV)和miRNA分析中的干扰机制研究

德国法兰克福大学医院创伤中心的研究团队针对创伤患者血清样本常见的溶血、脂血和胆红素污染问题，通过紫外-可见吸收光谱(UV-VIS)检测技术，系统分析了88例多发伤患者10天内采集的血清样本。研究发现31.8%样本存在溶血，15.9%呈现脂血，12.5%含有高胆红素；证实溶血会显著提升EV miR-16-5p表达，而脂血则干扰纳米颗粒追踪分析(NTA)对EV粒径和浓度的测定。该研究为创伤患者生物样本库的质量控制提供了重要依据，论文发表于《European Journal of Trauma and Emergency Surgery》。

　　

在创伤医学研究领域，高质量的生物样本是探索病理机制和开发诊疗技术的基础。然而，临床实践中采集的血清/血浆样本常常面临溶血、脂血和胆红素等干扰因素的困扰，这些"隐形杀手"不仅影响常规生化检测，更可能对新兴的细胞外囊泡(EV)研究造成难以察觉的偏差。特别是在多发伤患者中，紧急救治过程中的输血、麻醉药物使用以及代谢紊乱等因素，使得样本质量问题更加突出。德国法兰克福大学医院创伤中心的Birte Weber团队敏锐地捕捉到这一关键问题，他们发现常规视觉检查已无法满足EV生物样本库的质控需求，亟需建立更精准的检测方法。

研究人员采用紫外-可见吸收光谱(UV-VIS)技术，对88例损伤严重度评分(ISS)≥16的多发伤患者10天内采集的血清样本进行系统分析。通过测量350-660nm波长范围的吸收光谱，定量评估溶血、脂血和胆红素水平。同时结合临床参数（如甘油三酯、营养支持方案和丙泊酚麻醉记录），追溯干扰物质的来源。为验证这些干扰对EV研究的影响，团队采用尺寸排阻色谱(SEC)分离EV，通过纳米颗粒追踪分析(NTA)测定粒径分布，并利用qPCR技术检测EV内miR-16-5p的表达变化。

研究结果揭示了三类关键发现：在时间分布方面，溶血最常出现在急诊室(ER)样本(18.1%)，而脂血在创伤后第1天达到高峰。令人意外的是，溶血发生率与输血量或ISS评分无显著相关性，提示采样技术可能是主要诱因。在干扰源分析方面，脂血样本的甘油三酯(TAG)水平显著升高，且与丙泊酚麻醉呈现中度相关(r=0.64)。胆红素升高患者表现出更长的ICU住院时间和更高的死亡率(18.2% vs 15.6%)。最具突破性的发现在于干扰物质对EV研究的影响：溶血样本中EV miR-16-5p表达显著增加，证实该miRNA不适合作为内参基因；而添加20%肠外营养剂SmofKabiven的模拟实验显示，脂血会使NTA测得的EV平均粒径从80nm增至200nm，并显著提高表观颗粒浓度。

这项研究的意义体现在三个维度：方法学上，证实UV-VIS光谱是EV生物样本库质控的可靠工具；临床上，揭示了丙泊酚麻醉与样本脂血的潜在关联；科研应用上，首次系统评估了干扰物质对EV物理特性和miRNA谱的影响。特别是发现脂血会"伪装"成EV导致NTA数据失真，这一结论为EV研究设立了新的质控标准。正如作者强调的，在创伤这类特殊患者群体中，样本采集过程难以完全标准化，因此建立客观、快速的质控方法显得尤为重要。该研究不仅为创伤研究提供了质量保障方案，其发现对更广泛的液体活检领域也具有警示意义——当我们探索血液中纳米级生物标志物时，必须首先确保"观察窗口"的洁净度。未来研究可进一步探索自动化光谱检测设备的开发，以及干扰物质对不同EV分离方法的影响差异，为精准医学研究筑牢质量基石。