综述：Comparison of the quality of ovarian tissue cryopreservation by conventional slow cryopreservation and vitrification-a systematic review and meta-analysis（卵巢组织冷冻保存质量的比较：传统慢速冷冻与玻璃化冷冻的系统评价和荟萃分析）

这篇综述通过荟萃分析比较了传统慢速冷冻(conventional slow cryopreservation)与玻璃化冷冻(vitrification)在卵巢组织冷冻保存中的效果差异。研究纳入18项研究，结果显示两种方法在卵泡存活率(RR=0.96)、原始卵泡完整性(RR=1.01)、DNA片段化比例(RR=1.20)和基质细胞比例(RR=0.58)等方面均无统计学差异。文章指出当前冷冻保护剂(CPAs)配方缺乏标准化，建议开展更多高质量研究。该综述为临床医生选择生育力保存方案提供了循证依据。

　　

卵巢组织冷冻保存技术作为生育力保存的重要手段，近年来在临床应用中日益受到重视。这项技术特别适用于需要接受性腺毒性治疗的癌症患者以及青春期前女孩等无法进行卵母细胞冷冻保存的群体。自2004年首例通过冷冻卵巢组织移植获得活产以来，全球已有超过200例成功案例。目前主要的冷冻保存方法包括传统慢速冷冻和玻璃化冷冻两种，但关于哪种方法更具优势一直存在争议。

传统慢速冷冻采用程序化冷冻仪，使用较低浓度的冷冻保护剂（如1.5M丙二醇PrOH+0.2M蔗糖）进行梯度降温，最终将组织保存在-196℃液氮中。这种方法通过控制降温速率来减少冰晶形成，但冷冻过程耗时较长。玻璃化冷冻则采用高浓度冷冻保护剂（如20%乙二醇EG+20%二甲基亚砜DMSO），通过快速冷却使溶液形成玻璃态，能显著缩短冷冻时间，但高浓度冷冻保护剂可能带来细胞毒性风险。

解冻过程对两种方法都至关重要，需要将组织逐步复温至生理温度，并去除冷冻保护剂。解冻后的组织质量评估主要依靠组织学检查，其中卵泡存活率是最关键的指标，通常采用苏木精-伊红(HE)染色或活/死细胞检测等方法进行评估。此外，DNA完整性检测（如TUNEL法）和基质细胞状态评估也是重要的质量评价标准。

研究方法与结果分析
研究团队系统检索了截至2024年1月的PubMed、Embase和Cochrane Library数据库，最终纳入18项符合标准的研究进行荟萃分析。这些研究来自10个国家，其中中国占5项，德国3项。研究对象年龄多在20-40岁之间，卵巢组织主要通过腹腔镜手术获取，切成5×5×1-3mm³的小块后进行冷冻保存。

主要结局指标分析显示，两种冷冻方法在卵泡存活率方面无显著差异（RR=0.96，95%CI：0.84-1.09）。值得注意的是，Silber等研究发现玻璃化冷冻组的卵泡存活率显著高于慢速冷冻组（89.1% vs 41.7%），分析认为这可能与其使用的特殊冷冻保护剂配方（含合成血清替代物SSS）和先进的流式细胞检测方法有关。而Zhao等研究则得出相反结论，认为大块组织（15×15×2mm³）冷冻时慢速冷冻效果更优（82.9% vs 71.3%），这可能与玻璃化冷冻保护剂难以快速渗透大体积组织有关。

在原始卵泡完整性方面，合并分析8项研究的汇总结果显示两种方法无统计学差异（RR=1.01，95%CI：0.94-1.09）。但Zhao等研究再次显示慢速冷冻的优势（86.8% vs 73.8%），进一步支持了大块组织冷冻的特殊性。原始卵泡作为卵巢储备的主要来源，其保存质量直接关系到后续的生育潜力。

次要结局指标分析
DNA损伤是评估冷冻保存效果的重要指标。分析5项研究的合并数据表明，两种方法导致的DNA片段化比例无显著差异（RR=1.20，95%CI：0.94-1.54）。冷冻过程中不可避免会形成细胞内冰晶，这些冰晶可能通过机械损伤和化学损伤两种途径导致DNA链断裂。此外，冷冻保护剂本身的细胞毒性也可能直接造成DNA损伤。

基质细胞作为卵巢组织的重要组成成分，为卵泡发育提供微环境支持。3项研究的汇总分析显示两种冷冻方法对基质细胞比例的影响无统计学差异（RR=0.58，95%CI：0.20-1.65）。Chang等研究发现玻璃化冷冻组的基质细胞存活率更高（60.7% vs 47.8%），可能因为较小的基质细胞能更快达到玻璃化状态，减少冰晶损伤。

技术局限性与未来展望
当前研究存在的主要局限性在于冷冻方案的异质性。不同研究使用的冷冻保护剂组合各不相同，常见的渗透性保护剂包括DMSO（5-10%）、EG（10-20%）和PrOH等，非渗透性保护剂主要为蔗糖。这些成分在浓度配比上缺乏统一标准，使得研究间难以直接比较。此外，临床妊娠率这一最关键的评价指标因样本量有限而未能纳入分析。

未来研究应着重解决以下问题：建立标准化的冷冻保护剂配方；优化大体积组织冷冻方案；开发减少氧化应激（ROS）损伤的新型冷冻添加剂（如过氧化氢酶）；开展长期随访评估移植后的内分泌功能和活产率。虽然目前卵巢组织冷冻保存仍被视为实验性技术，但随着自体移植技术的进步，其在恢复内分泌功能方面已展现出独特优势。临床医生应根据患者具体情况，权衡两种冷冻方法的特点，为患者提供个体化的生育力保存方案。