基于小而电子密度高的蛋白质 Csp1 的冷冻电镜（cryo-EM）研究新型 “生物标签”：开启结构解析新征程

为解决小蛋白在单颗粒冷冻电镜（cryo-EM）技术中因信噪比低难以研究的问题，研究人员开展了用 Csp1 作为 “生物标签” 的研究。结果表明 Csp1 能助力解析其自身及结合蛋白结构，经优化有望用于 cryo-EM 研究。

　　小蛋白通过单颗粒冷冻电镜（cryo-EM）技术进行研究颇具挑战，因其信噪比低，难以识别和分析。在此，研究人员探究了小（54kDa）的四聚体金属结合蛋白 Csp1 作为 “生物标签” 以克服这一难题的可行性。研究发现，Csp1 结构紧凑、性质稳定，在冷冻电镜显微照片中呈现出增强的电子散射能力和出色的颗粒对比度。因此，研究人员利用标准冷冻电镜方法将 Csp1 的结构解析至 2.98? 的分辨率。研究人员还测试了 Csp1 能否作为 “标签” 或标记物，辅助确定与其结合的蛋白质的结构。具体而言，研究人员分析了与抗体 1D4 的约 40kDa Fab 片段结合的表位标记 Csp1。这些复合物的数据产生了复合物（5.70?）和结合的 1D4 Fab（5.40?）的中等分辨率结构。这些结果表明，经过进一步优化，富含电子的 Csp1 有望成为冷冻电镜研究中极具前景的 “生物标签”。