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结直肠癌（CRC）治疗面临诸多挑战，如化疗副作用大等。研究人员开发了含 miR-143 和 AS1411 适配体的杂合分子 Dox-MAH。结果显示其能抑制 CRC 细胞增殖、诱导凋亡。这为 CRC 治疗提供了新策略。
在癌症治疗的战场上，结直肠癌（Colorectal Cancer，CRC）一直是个棘手的 “敌人”。根据 GLOBOCAN 2020 数据，CRC 在全球癌症发病率中排名第三，还是癌症死亡的第二大主因 。当前针对 CRC 的治疗手段多种多样，像手术、化疗、放疗、靶向治疗和免疫治疗等。手术在肿瘤还局限的时候能发挥不错的效果，但很多时候，患者发现病情时往往已经错过最佳手术时机。化疗呢，虽然能杀死癌细胞，可它的副作用却让患者苦不堪言，恶心、呕吐、腹泻都是轻的，还有白细胞减少、不可逆的心脏毒性等严重问题，而且肿瘤还会对化疗药物产生耐药性。为了克服这些难题，让癌症治疗更高效、更安全，研究人员踏上了探索新型治疗方法的征程。
泰国法政大学（Thammasat University）的研究人员勇挑重担，开展了一项意义重大的研究。他们致力于开发一种新型杂合抗癌药物载体，把目光聚焦在了 miR-143、AS1411 适配体、阿霉素（Doxorubicin，Dox）上。最终，他们成功制备出了杂合分子 Dox-MAH，这个 “秘密武器” 在抑制 CRC 细胞生长方面表现出色，能有效诱导细胞凋亡，就像是给癌细胞设下了重重 “关卡”，大大降低了癌细胞的 “战斗力” 。该研究成果发表在《Scientific Reports》上，为 CRC 的治疗开辟了新的方向。
在这项研究中，研究人员运用了多个关键技术方法。首先是核酸杂交技术，通过精心设计互补的寡核苷酸序列，让 miR-143、AS1411 适配体和杂交链（HBS）成功 “牵手”，形成稳定的 MAH。接着，利用定量逆转录聚合酶链式反应（qRT-PCR）和蛋白质免疫印迹法（Western blot），精准测定相关基因和蛋白的表达水平。还有荧光显微镜技术，能直观观察细胞对 MAH 的摄取情况。
下面来看看具体的研究结果。
- MAH 的形成与稳定性：研究人员把 miR-143、AS1411 适配体和 HBS 按一定比例混合，在室温下 “静静等待” 48 小时后，MAH 成功诞生。10% 天然聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示，出现了对应 MAH 大小（151bp）的清晰条带。而且，MAH 在体外相当稳定，在 37℃、5% CO2 环境下放置 7 天，条带依然清晰可见，甚至产物数量还有所增加。
- miR-143 的表达：研究人员对比了 CRC 细胞系（SW480 和 Caco-2）和正常结肠上皮细胞系（CCD 841 CoN）中 miR-143 的表达水平。结果发现，CRC 细胞里的 miR-143 表达明显下调，其中 SW480 细胞中的表达量比 Caco-2 细胞更低，这也为后续以 SW480 细胞为主要研究对象提供了依据。
- MAH 的细胞摄取：给适配体带上绿色荧光标签 FAM 后，研究人员发现，SW480 细胞在与 MAH “接触” 后，发出的荧光信号比 MNH（miR-143、非特异性适配体和 HBS 的复合物）处理组和未处理对照组强得多，这表明 MAH 能特异性地结合 SW480 细胞。同时，在正常的 CCD 841 CoN 细胞中，MAH 和 MNH 处理后都没引起荧光强度变化，进一步证实了 MAH 对癌细胞的高特异性。而且，经 MAH 处理的 SW480 细胞中，miR-143 的表达水平比 MNH 处理组和未处理组高出 4 倍，说明 MAH 能成功把 miR-143 送进癌细胞。
- miR-143 对靶基因产物的影响：KRAS 是 miR-143 的直接作用靶点。研究人员发现，经 MAH 处理的 SW480 细胞，KRAS 的 mRNA 和蛋白水平都下降了约 0.5 倍。同时，KRAS 下游的靶蛋白 AKT 和 ERK 水平也显著降低，分别下降了约 0.6 倍，这意味着 miR-143 有效地阻断了 KRAS 的信号传导网络。
- Dox 的嵌入与释放：Dox 凭借自身能嵌入 DNA 双链的特性，成功融入 MAH。荧光光谱显示，Dox 单独存在时，在约 590nm 处有荧光发射峰，和 MAH 结合后，荧光明显被抑制，证明嵌入成功。在模拟细胞内环境的实验中，Dox 从 MAH 中缓慢释放，1 小时约释放 5%，48 小时达到约 80% ，显示出良好的缓释性能。
- 对细胞增殖和凋亡的影响：用不同处理组（MAH、MNH、Dox、Dox-MAH、Dox-MNH）处理 SW480 细胞和 CCD 841 CoN 细胞后发现，Dox-MAH 对 SW480 细胞增殖的抑制效果和 Dox 单独使用时相当，且对正常的 CCD 841 CoN 细胞几乎没有毒性。在诱导凋亡实验中，Dox-MAH 诱导 SW480 细胞凋亡的能力和 Dox 相近，显著高于 Dox-MNH 处理组。进一步的 Western blot 分析发现，Dox-MAH 处理后，促凋亡蛋白 Bax 水平上升，抗凋亡蛋白 Bcl-2 和 procaspase-3 水平下降，表明 Dox-MAH 通过线粒体依赖途径诱导细胞凋亡。
综合来看，研究人员成功制备的杂合分子 Dox-MAH，集多种优势于一身。AS1411 适配体赋予它靶向癌细胞的能力，miR-143 能精准抑制 KRAS 及其下游信号通路，Dox 的缓慢释放保证了持续的抗癌效果。不过，目前研究还存在一定局限性，比如没有直接证明 Dox-MAH 能减少像心脏毒性这样的副作用。但这依然无法掩盖这项研究的重要意义，它为 CRC 治疗提供了一种全新的多靶点治疗策略，有望在未来改善 CRC 患者的治疗现状，为癌症治疗领域带来新的曙光。
