基于RT-LAMP技术的绿豆菜豆普通花叶病毒(BCMV)快速可视化检测方法开发
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时间:2025年03月29日
来源:VirusDisease
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为解决绿豆菜豆普通花叶病毒(BCMV)传统检测方法耗时长、灵敏度低的问题,研究人员开发了逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)技术。该技术通过靶向BCMV基因组的三对特异性引物,在60°C/30分钟条件下实现10?9超高灵敏度检测,比RT-PCR灵敏度高100倍,且与PVY、BCMNV等病毒无交叉反应。结合SYBR Green I显色技术,可实现裸眼判读,为田间病毒防控提供高效工具。
菜豆普通花叶病毒(Bean common mosaic virus, BCMV)是豆科作物最具破坏性的马铃薯Y病毒属(Potyvirus)成员之一,在绿豆(Vigna radiata)中可造成严重减产。本研究创新性地建立逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测体系,针对BCMV基因组设计三对特异性引物,通过45-70°C温度梯度测试确定60°C为最佳反应温度。该技术仅需30分钟即可完成扩增,灵敏度高达10?9稀释度,较传统RT-PCR提升两个数量级,且与马铃薯Y病毒(PVY)、菜豆普通花叶坏死病毒(BCMNV)等近缘病毒无交叉反应。阳性样本在琼脂糖凝胶上呈现特征性梯状条带,结合SYBR Green I显色剂可实现肉眼判读,突破实验室设备限制。该成果为种子检疫和田间病毒监测提供了一种便携、高效的分子诊断方案。
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